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葉緑体機能発現のシグマ因子を介する核支配調節機構

西格玛因子介导的叶绿体功能表达的核控制机制

基本信息

批准号：
12025227
负责人：
小林裕和
金额：
$ 2.3万
依托单位：
University of Shizuoka
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

葉緑体における光合成遺伝子の転写を司るplastid-encoded plastid RNAポリメラーゼ(PEP)は,そのコア酵素を構成するα,β,β',およびβ″サブユニットが葉緑体ゲノムにコードされており,転写される遺伝子のプロモーター特異性を支配していると考えられるシグマ(σ)因子が核ゲノムにコードされている.シロイヌナズナ緑葉において機能しているσ因子のリン酸化などの修飾状況を解析するためには,緑葉細胞からσ因子を回収しなければならない.合成ペプチドを用いて作製したSIG1(遺伝子命名変更)特異的抗体は,遊離型SIG1の認識および回収には有効であった.しかしながら,緑葉細胞内において,σ因子は主としてPEPホロ酵素として存在すると考えられ,その回収にSIG1特異的抗体は不向きである.コア酵素を構成するa,β,およびβ″サブユニットのC末端約200アミノ酸をチオレドキシン融合タンパク質として,大腸菌において発現させた.また,同様の方法論により,各SIGを発現させ,ウサギを用いて抗体を作製した.さらに,緑葉細胞からσ因子を回収する手段として,ヒスチジンタグおよびV5エピトープタグの利用を検討した.すべてのSIGsは,前駆体として合成され,葉緑体への取込みとともに,transitpeptideが切断され,機能する成熟体σ因子になると考えられる.シロイヌナズナ緑葉において高発現し,かつ葉緑体遺伝子転写開始活性の高いSIG1に注目した.SIG1特異的抗体の利用およびin vitro転写・翻訳系により作らせた^<35>S-標識SIG1前駆体を単離葉緑体に取込ませることにより,成熟体サイズを検討した.

The plastid-encoded plastid RNA polymorphism (PEP) of chloroplast photosynthetic genes is composed of α,β,β ",β" and β "enzymes. The chloroplast DNA is characterized by its specificity and specificity. Green leaf cell function analysis of sigma factor acidification and modification, green leaf cell sigma factor recovery. Synthetic SIG 1 antibody is used to control SIG1(genetic name change), and free SIG1 antibody is recognized. In green leaf cells, sigma factor is the main enzyme for PEP, and SIG1 specific antibodies are not present. About 200 amino acids at the C-terminal of the α-enzyme that forms the α-,β-, α-and β-"β-subunit are fused to the β-protein, which is found in Escherichia coli. In the same methodology, SIG was developed, and it was used to control antibodies. In this paper, green leaf cell sigma factor recovery means, the use of green leaf cell sigma factor and V5 gene is discussed. SIGs are synthesized in probodies, chloroplasts are isolated,transitpeptide is cut off, and functional mature sigma factors are examined. SIG1-specific antibodies are used in vitro-specific systems. SIG1-specific antibodies are used in vitro systems. SIG1<35>-specific probodies are isolated from chloroplasts.