抗体工学に関する基礎的・応用的研究
抗体工学に関する基礎的・応用的研究
抗体工程基础与应用研究
批准号：
04205021
负责人：
荒田 洋治
金额：
$1.28万
依托单位：
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
1992 至 --
中文摘要
翻译
マウス抗ダンシル(DNS)抗体のV_H、V_Lからかる可変領域フラグメントF_V(MW:25K)を用い、抗原認識部位の解析を行った。抗体産生細胞を種々の安定同位体標識アミノ酸を含む無血清培地下で培養し、部位特異的に標識した抗体を得た。安定同位体標識FvフラグメントはC_H1ドメイン欠損抗体をクロストリパインで消化して得た。昨年度までの研究の結果、抗原存在下でFvフラグメントの2個のTyr残基が抗原のダンシル環と分子間NOEを示すことが明らかになった。そこで、本年度は安定同位体フィルター法NMRを用いて、Fvフラグメント中に存在する全てのTyr残基側鎖のNMRシグナルを帰属し、その抗原認識機構を解析した。既に完了している主鎖アミド基の帰属をHMQC-HOHAHAを用いて、Cαプロトンまで拡張する。次に、帰属の確定したCαプロトンとTyr残基側鎖の2',6'プロトンをω_1-filtered NOESYにより連結する。さらに、Tyr残基側鎖の2',6'プロトンと3',5'プロトンはHOHAHAスペクトルにより連結する。これらの解析の結果、Fvフラグメント中に存在する全てのTyr残基側鎖の帰属が抗原存在下および抗原非存在下において完了した。確定した帰属に基づいてFvフラグメントと抗原との分子間NOEを解析したところ、ダンシル環の近傍(4A以内)にH鎖CDR3の根元に位置する、Tyr-96HとTyr-104Hが存在することが判明した。この結果は、昨年度までに行ったスピンラベルハプテンを用いた結果とも一致した。
英文摘要
マウス抗ダンシル(DNS)抗体のV_H、V_Lからかる可変領域フラグメントF_V(MW:25K)を用い、抗原認識部位の解析を行った。抗体産生細胞を種々の安定同位体標識アミノ酸を含む無血清培地下で培養し、部位特異的に標識した抗体を得た。安定同位体標識FvフラグメントはC_H1ドメイン欠損抗体をクロストリパインで消化して得た。昨年度までの研究の結果、抗原存在下でFvフラグメントの2個のTyr残基が抗原のダンシル環と分子間NOEを示すことが明らかになった。そこで、本年度は安定同位体フィルター法NMRを用いて、Fvフラグメント中に存在する全てのTyr残基側鎖のNMRシグナルを帰属し、その抗原認識機構を解析した。既に完了している主鎖アミド基の帰属をHMQC-HOHAHAを用いて、Cαプロトンまで拡張する。次に、帰属の確定したCαプロトンとTyr残基側鎖の2',6'プロトンをω_1-filtered NOESYにより連結する。さらに、Tyr残基側鎖の2',6'プロトンと3',5'プロトンはHOHAHAスペクトルにより連結する。これらの解析の結果、Fvフラグメント中に存在する全てのTyr残基側鎖の帰属が抗原存在下および抗原非存在下において完了した。確定した帰属に基づいてFvフラグメントと抗原との分子間NOEを解析したところ、ダンシル環の近傍(4A以内)にH鎖CDR3の根元に位置する、Tyr-96HとTyr-104Hが存在することが判明した。この結果は、昨年度までに行ったスピンラベルハプテンを用いた結果とも一致した。
期刊论文(8)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
登录
查看更多内容
金 夏亨: "^<13>C-NMR spectral analysis of the structures of mouse immunoglobulin Gl carrying allotypes a and j" J.Immunological Methods. 153. 223-227 (1992)
Kim Hyahyung：“携带同种异型a和j的小鼠免疫球蛋白G1的结构的13 C-NMR光谱分析”J.ImmunologicalMethods.153.223-227(1992)。
Kim Hyahyung：“携带同种异型a和j的小鼠免疫球蛋白G1的结构的13 C-NMR光谱分析”J.ImmunologicalMethods.153.223-227(1992)。
DOI：
--
发表时间：
期刊：
影响因子：
--
作者：
[]
通讯作者：
尾高 麻乃: "Isotope-edited nuclear magnetic resonance study of Fv frangment of anti-dansyl mouse monoclonal antibody:recoqnition of the dansyl hapten" Biochemistry. 31. 10686-10691 (1992)
Mayo Odaka：“抗丹磺酰小鼠单克隆抗体 Fv 片段的同位素编辑核磁共振研究：丹磺酰半抗原的识别”生物化学 31. 10686-10691 (1992)。
Mayo Odaka：“抗丹磺酰小鼠单克隆抗体 Fv 片段的同位素编辑核磁共振研究：丹磺酰半抗原的识别”生物化学 31. 10686-10691 (1992)。
DOI：
--
发表时间：
期刊：
影响因子：
--
作者：
[]
通讯作者：
合田 浩明: "Three-dimensional solution structure of the B domain of staphylococcal protein A: comparisons of the solution and crystal structures" Biochemistry. 31. 9665-9672 (1992)
Hiroaki Goda：“葡萄球菌蛋白 A 的 B 结构域的三维溶液结构：溶液和晶体结构的比较”生物化学 31. 9665-9672 (1992)。
Hiroaki Goda：“葡萄球菌蛋白 A 的 B 结构域的三维溶液结构：溶液和晶体结构的比较”生物化学 31. 9665-9672 (1992)。
DOI：
--
发表时间：
期刊：
影响因子：
--
作者：
[]
通讯作者：
高橋 栄夫: "Dynamical structure of the antibody combining site as studied by ^1H-^<15>N shift correlation NMR spectroscopy" Biochemistry. 31. 2464-2468 (1992)
Hideo Takahashi：“通过^1H-^15N位移相关NMR光谱研究的抗体结合位点的动态结构”生物化学31.2464-2468(1992)。
Hideo Takahashi：“通过^1H-^15N位移相关NMR光谱研究的抗体结合位点的动态结构”生物化学31.2464-2468(1992)。
DOI：
--
发表时间：
期刊：
影响因子：
--
作者：
[]
通讯作者：
抗体工学に関する基礎的・応用的研究
-
批准号：03205020
-
项目类别：Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
-
资助金额：$1.34万
-
财政年份：1991
-
负责人：荒田 洋治
-
依托单位：
抗体工学に関する基礎的・応用的研究
-
批准号：02205022
-
项目类别：Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
-
资助金额：$1.92万
-
财政年份：1990
-
负责人：荒田 洋治
-
依托单位：
免疫グロブリンの構造設計と機能制御
-
批准号：62604524
-
项目类别：Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
-
资助金额：$1.28万
-
财政年份：1987
-
负责人：荒田 洋治
-
依托单位：
痕跡成分の分析のための相関NMRシステムの改良
-
批准号：X00090----254178
-
项目类别：Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
-
资助金额：$0.99万
-
财政年份：1977
-
负责人：荒田 洋治
-
依托单位：
海外基金