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植物オルガネラDNAの複製開始機構

植物细胞器DNA的复制启动机制

基本信息

批准号：
04256214
负责人：
武田穣
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04256214/
关键词：
複製開始点プラスチド

项目摘要

タバコ培養細胞BY2を用い、プロブラスチドDNAの複製開始領域を決定した。この培養細胞の定常期細胞を新鮮培地に移植すると、核DNA合成に先行してプロブラスチドDNA合成が始まる。この時期の細胞から、プロプラスチドDNAを単離し、DNA複製中間体に富む画分を調製した。この画分をプローブとしてハイブリダイゼーションを行なったところ、プロプラスチドDNA中の約30KbのInverted Repeat由来の断片に強くハイブクダイズした。この結果から、Inverted Repeat内の領域で複製が開始されることが示唆された。更に、複製中間体の電子顕微鏡観察を行ない、D-ループの位置から複製開始領域がInverted Repeatの末端近くにあること、複製は両方向に進むこと、2ケ所存在する同一の塩基配列を有する領域がin ofvoで共に複製を開始させることが明らかになった。現在、この領域を含むプラスミドをパーティクルガンを用いて、プロプラスチド中に導入することを試みている。薬剤耐性をマーカーとして用いることができないため、プロプラスチドDNAを回収後、大腸菌に形質転換してアッセイしている。各種プラスミドDNAを用いた実験において、回収されたプラスミドDNAは最初のプラスミドとは全く異なっていた。これは、プロプラスチド中でDNAの組換が高頻度で起きたことが原因であると考えられる。この組換プラスミドは最初に用いたプラスミドの10分の1の大きさのインサートした持っていない。この組換プラスミドがプロプラスチド中で複製できるかどうか検討中である。

The area in which DNA replication begins is determined by the use of culture cells. These cultured cells are transplanted into fresh culture, and DNA synthesis is initiated. In this period, the cells were isolated and the DNA replication intermediates were modulated. The Inverted Repeat of about 30Kb of DNA from the original fragment is strong. The result of this is that the field in the Inverted Repeat is starting to copy. In addition, the electron microscope of the replication intermediate is located at the beginning of the replication process. The replication process starts at the end of the replication process. The replication process starts at the end of the replication process. The replication process starts at the beginning of the replication process. Now, this domain includes the following options: select the domain name, and select the domain name. The resistance of the bacteria to DNA and the change of the form of E. coli All kinds of DNA are used in different ways. The reason for this is that the DNA composition is highly frequent. The first part of this article is about 10 minutes and the second part is about 10 minutes. This is a very important part of the process.