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単一真核緑藻クロレラの各種遺伝子のクローン化

真核绿藻小球藻多种基因的克隆

基本信息

批准号：
61580221
负责人：
武田穣
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1986
资助国家：
日本
起止时间：
1986 至 1988
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は単一真核緑藻クロレラの細胞増殖に関与する遺伝子のクローニングを目指した。RuBisCO、rRNA、ヒストン等の遺伝子を検索後、細胞増殖に密接に関連するプロトオンコジーン遺伝子の探索に進んだ。比較的穏和なハイグリダイゼーションの条件でクロレラゲノムDNAライブラリーより、2種のv-myc様DNA断片を検出、その一つをクローン化し、塩基配列を決定した。このv-myc様DNA断片は、4.8Kの長さであるが、λ組換ファージからプラスミドにサブクローンする際、全体では成功せず、2つのDNA断片に分けることによって初めて成功した。各種脊椎動物のc-myc、v-mycの遺伝子構造を参照、CMDのFicketテスト、ORF領域、エンハンサー様配列、ポリA+mRNAとのハイブリダイゼーションの状況等を考慮し、三つのエクソン、二つのイントロン、脊椎動物で高く保存されているBox A、Box B部等を推定し、三つのChlorella mycモデルを提案した。これらモデルで、既報の全てのc-mycに共通な、エクソン2での高いGC含量(岩村による)が見出された。細胞周期各段階にある細胞のポリA+mRNAは小麦胚芽無細胞蛋白合成系で翻訳された。そしてG1後期からS直前期にかけてポリA+mRNA量は増加し、後者ではより高分子及び塩基性の蛋白が急増した。クロレラv-myc様DNA断片(CMD)をプローブとして、CMDの転写産物を解析した結果、この転写産物は、細胞周期全体を通じて存在し、特にS直前期に上昇した。以上の事実により、クロレラv-myc様DNA断片はCh-mycの可能性があり、今後の研究により、c-myc機能の解明にも役立つと考えられる。

This study aimed to investigate the relationship between cell proliferation and genetic diversity of eukaryotic green algae. After the discovery of RuBisCO, rRNA, RNA and other genes, the exploration of gene expression in cell proliferation is further developed. Comparison of the conditions of DNA fragmentation, identification of two kinds of v-myc DNA fragments, and determination of nucleotide alignment The v-myc DNA fragment was successfully separated from the 4.8K DNA fragment and the λ DNA fragment was successfully separated from the 4.8K DNA fragment. Reference to c-myc and v-myc gene structure of various vertebrates, consideration of CMD's Ficket name, ORF domain, gene distribution, A+mRNA and its status, estimation of three kinds of solutions, two kinds of solutions, Box A and Box B of vertebrate high preservation, and proposal of three kinds of Chlorella myc gene distribution. The high GC content (Iwamura) of all reported c-myc compounds was observed. A+mRNA in cells at all stages of the cell cycle is responsible for wheat germ cell-free protein synthesis. The amount of A+mRNA increased in the late G1 phase and increased in the early G1 phase, while the amount of A+mRNA increased rapidly in the late G1 phase and increased in the late G1 phase. DNA fragments (CMD) were detected by PCR and analyzed by PCR. The results showed that the CMD products were detected by PCR and the whole cell cycle existed. The possibility of ch-myc DNA fragment is discussed in the paper. The function of c-myc is clarified in the paper.