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葉緑体包膜の迸別輸送因子の研究

叶绿体包膜运输因子的研究

基本信息

批准号：
04259214
负责人：
佐々木幸子
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04259214/
关键词：
CEMA 葉緑体包膜葉緑体ゲノム蛋白質の輸送

项目摘要

葉緑体ゲノムにコードされた未同定遺伝子の一つが葉緑体包膜に発現していることを我々のクループはこれまでの研究で明らかにして来た。この遺伝子をcemAと命名した。本研究では,この遺伝子産物CEMAの機能を明らかにすることを目的としている。CEMAを融合蛋白質として大腸菌に発現し,この蛋白質を精製後抗原として用い,ポリクロナル抗体を得た。本抗体を用いて,葉緑体への蛋白質輸送がどの程度影響を受けるか調べた。葉緑体に輸送される代表的な蛋白質であるリブロースニリン酸カルボキシラーゼの小サブユニットpSと,クロロフィル結合蛋白質Cabの2つの蛋白質の輸送を調べた。antiCEMAIgGはpSの葉緑体への輸送を部分的に阻害したが,Cabの輸送を阻害しなかった。つぎにIgGからFab断片を作成し阻害実験を試みたが,阻害効果がみられなかった。Fab断片にすることで抗体価が底下したためと考えられる。またIgGを使う実験は非特異的反応も起る可能性があるので更に別の抗体を作成し検討する必要が生じた。CEMAは葉緑体内包膜に局在する蛋白質である。この蛋白質のトポロジーをKKR法で解析して調べ,膜から突出している73アミノ酸残基からなるドメインをみつけた。このドメインの抗体を作成するために本配列をEcdiのMALベクターに組み込み,蛋白質を得た。これを適当な方法で精製し,抗原とし,ポリクロナル抗体を得た。この抗体がどのように輸送に影響するか今後検討する予定である。

The chloroplast envelope was discovered in the first place, and the chloroplast envelope was discovered in the second place. The name of the child is cemA. In this study, the function of CEMA, a genetic product, was clarified. CEMA fusion protein is produced in E. coli, and the protein is purified to produce antigen and antibody. When the antibody is used, the protein transport of chloroplast is affected to a certain extent. Chloroplast transport represents the regulation of protein transport by binding protein Cab 2. AntiCEMAIgG is a partial inhibitor of chloroplast transport in pS and Cab. Fab fragments are created to block the process, and block the process. Fab is the most common type of antibody. The possibility of non-specific antibody production is discussed. CEMA is a protein in the inner envelope. The protein was analyzed by the KKR method, and the membrane was exposed to acid residues. This is the first time I've ever seen an antibody that's been produced. The antigen was purified by appropriate methods, and the antibody was obtained. This antibody is not intended to be transmitted.