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光形態形成に関わるYPT/rabタンパク質の機能の解析

YPT/rab蛋白参与光形态发生的功能分析

基本信息

批准号：
08262208
负责人：
佐々木幸子
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08262208/
关键词：
光形態形成小胞輸送エンドウ CTP結合タンパク質伸長

项目摘要

光形態形成に関わるTPT/rab蛋白質の機能を解析するために以下の実験を行い、新しい知見を得た。本研究ではエンドウのpra2 proteinと名ずけたYPT/rab蛋白質を対象としている。この蛋白質は暗所生育エンドウの茎の成長領域に多く発現し、光が当たると消失するので、発芽直後の実生の光形態形成に関わると推測されている。(1)pra2 proteinは伸長する茎の膜画分にある。どの膜画分に局在するか以下の方法で調べた。1、in situ hybridizationで細胞特異的分布を調べた。予測どうり、mRNAは伸長部位の小さな細胞に分布していた。2、細胞膜分画で細胞内のどの膜にあるか調べた。ゴルジ膜画分に多かった。しかし、細胞膜画分にも多く、更に詳細に調べなければならない。3、免疫電子顕微鏡法で局在を調べたが、本タンパク質がごく微量(0.01%)のためか、信頼出来る結果は得られなかった。(2)pra2 proteinを過剰発現させた形質転換タバコを作成した。T0、T1の形態、及び暗所生育実生形態に、変化は見られなかった。mRNA量はエンドウ茎伸長部位よりも多く発現していても、pra2 proteinはエンドウ茎伸長部位と同じ程度しかなかった。多分不必要な蛋白質であるため、分解されるのであろう。(3)GDP型またはGTP型GST-pra2 fusion protein columnを用いて、これと特異的に相互作用する分子を探した。エンドウ暗所茎伸長部位抽出液をこのカラム流し、探索した。可溶性画分に1つと不溶性画分に1つの蛋白質をみつけた。今後、この蛋白質の正体を明らかにしていきたい。

TPT/RAB protein function analysis related to photomorphogenesis In this study, the expression of pra2 protein was detected by YPT/RAB protein. The protein appears frequently in the growth field of the stem, and is presumed to be involved in the formation of light forms after germination. (1)Pra2 protein is not elongated. The following methods are used to adjust the film composition. 1. In situ hybridization, cell-specific distribution is modulated. The distribution of mRNA in small cells at the site of elongation was predicted. 2. Cell membrane separation and painting. The film is divided into several parts. The cell membrane is divided into many parts, and more detailed adjustments are made. 3. Immunoelectron microscopy is used to detect the presence of trace amounts of trace amounts (0.01%) and to detect the presence of trace amounts. (2)Pra2 protein is produced in the form of a protein. T0, T1, and dark birth patterns mRNA levels vary from stem elongation site to stem elongation site, and pra2 protein levels vary from stem elongation site to stem elongation site More unnecessary protein, decomposition. (3) GDP-type and GTP-type GST-pra2 fusion protein columns are used to explore specific molecular interactions. The extraction fluid of the stem elongation part is extracted from the stem elongation part. Soluble fraction 1 insoluble fraction 1 protein fraction From now on, the protein in the body will be released in the future.