遺伝的多型と連鎖の解析による遺伝子病保因者診断への新しいアプローチ

利用遗传多态性和连锁分析诊断遗传病携带者的新方法

• 批准号: 04260226
• 负责人: 今村 孝
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: National Institute of Genetics
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 1992
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04260226/
• 关键词: 遺伝子診断; 分子病; 保因者; 多型; 連鎖マーカー; サラセミア; 筋ジストロフィー症

遺伝病の原因を遺伝子(変異)のレベルにまでさかのぼって解析できれば、各家系における保因者診断は最も確実なものとなる。この研究では、比較的小さな遺伝子領域の変異の解析モデルとしてβグロビン遺伝子を選び、グロビンの合成障害をきたすサラセミア遺伝子変異の解析方法を検討した。目的の領域をPCR増幅し、直接、塩基配列の解析を行うことによって、ヘテロ接合保因者の遺伝子変異部位で正常と異常の2塩基配列を同時に検出することができる。この方法を用いて、日本人家系から新しいβサラセミア(IVS-1-2G→A)変異を見い出した。βグロビン遺伝子領域では、サラセミアの原因となる変異はすでに80種類以上が知られているから、病因に関する遺伝的異質性が明らかである。したがって、常に新しい変異に遭遇する可能性を考えると、直接シーケンスが有用である。また、比較的大きな遺伝子でも、イントロンが除かれた後のmRNAは、塩基配列の解析が可能な範囲の大きさを持つことが多い。とくに、HPRT遺伝子(44kb)のように、どの組識細胞でも発現されるようなものでは、RT-PCR法を用いて、mRNAからcDNA(1.6kb)を増幅合成し、直接シーケンスを目指すことができる。一方、Duchenne型筋ジストロフィ症(DMD)遺伝子、血友病A遺伝子などに代表される巨大遺伝子では、個々のエクソン領域の塩基配列を詳しく解析することは実際的でないので、目的とする遺伝子領域内の多型を連鎖マーカーとする間接的な診断方法を選択しなければならない。DMD遺伝子領域には、5′DYS-I、-II、-III、IV、また、イントロン44、45、49、50などの2塩基(CA)n繰り返し配列が存在する。日本人集団について調べた結果、これらのマーカー遺伝子は、いずれも複対立遺伝子で構成され、平均ヘテロ接合性は70%以上を示した。

The cause of the disease, the genetic variation, the analysis of the disease, the diagnosis of the cause of the disease, the diagnosis of the disease, and the diagnosis of the disease. This study is aimed at analyzing differences in the small and comparative fields of genetic analysis, and discussing methods for analyzing differences in genetic selection, genetic synthesis, and genetic analysis. The target domain PCR amplification, direct, base alignment analysis, simultaneous detection of normal and abnormal base alignment This method is used in Chinese, Japanese families from the new to the new (IVS-1-2G→A) to see the difference The heterogeneity of more than 80 kinds of genetic information related to the causes and causes of disease in the sub-domain of beta virus infection is obvious. The possibility of encountering something new and different is examined. The analysis of mRNA and nucleotide sequences after the deletion of mRNA and nucleotide sequences is possible. In addition, HPRT gene (44kb) was synthesized by PCR, mRNA and cDNA(1.6 kb) were synthesized by PCR, and the expression of HPRT gene was directly detected by PCR. Duchenne type muscle disorder (DMD) gene and hemophilia A gene represent a large gene, a specific gene, and a specific gene sequence in the domain of DMD. DMD sub-domains: 5′DYS-I, -II, -III, IV, 4 ′DYS-I, 4 ′ DYS-II, 4 ′ DYS-II, 5 ′ DYS-II, 4 ′ DYS-II, 4 ′ DYS-II, 5 ′ DYS-II, 4 ′ DYS-II, 5 ′ DYS-II, 4 ′ DYS- The Japanese population has a high average zygosity of 70% or more as a result of the study.

项目成果

Y.Chifu H.Nakashima T.Imamura: "-Thalassemia major resulting form a compound heterozygosity for the -globin gene mutations: evidence for multiple origin and migration of the thalassemia gene." Human Genetics. 89. 343-346 (1992)

Y.Chifu H.Nakashima T.Imamura：“-珠蛋白基因突变复合杂合性导致重型地中海贫血：地中海贫血基因多重起源和迁移的证据。”

T.Imamura H.Nakashima: "Molecular evaluation of an Alu repeat including a polymorphic variable poly(A)(AluVpA) with single strand template fixed on the magnetic beads."

T.Imamura H.Nakashima：“对包含固定在磁珠上的单链模板的多态性变量 Poly(A)(AluVpA) 的 Alu 重复序列进行分子评估。”

H.Nakashima T.Imamura: "Flourescent in situ hybridization(FISH) ordering of reference markers within short and long arms of the human chromosome 18."

H.Nakashima T.Imamura：“人类 18 号染色体短臂和长臂内参考标记的荧光原位杂交 (FISH) 排序。”

T.Imamura H.Nakashima: "Isolotion of the human chromosome-specific CA repeat markers directly from hybrid cell lines by the Alu-CAPCR method."

T.Imamura H.Nakashima：“通过 Alu-CAPCR 方法直接从杂交细胞系中分离人类染色体特异性 CA 重复标记。”

T.Imamura H.Nakashima: "Indirect DNA diagnosis of the carrier state with poly-morphic markers within the disease specific gene gegion"

T.Imamura H.Nakashima：“利用疾病特异性基因gegion内的多态性标记对携带者状态进行间接DNA诊断”