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線虫の興奮一収縮連関におけるカルシウムチャンネル遺伝子の構造と機能

线虫兴奋-收缩关系中钙通道基因的结构和功能

基本信息

批准号：
04270212
负责人：
香川弘昭
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ウサギのリアノジン受容体cDNA断片を用いて、線虫のリアノジン受容体遺伝子のcDNAの膜貫通領域をクローン化した。線虫の伊理的染色体地図上の第V染色体左側に位置づけ、当該コモミドクローンを解析して、約60%(16kb)のリアノジン受容体遺伝子構造を明らかにした。なお、クローン化した線虫のcDNAは未発表の段階でショウジョウバエのリアノジン受容体遺伝子クローニングのために供与された。1)転写産物の同定とcDNAクローン解析:cDNAライブラリーをスクリーニングし、4つ得られたcDNAの塩基配列を決定したアミノ酸に翻訳したところ、ウサギのリアノジン受容体の膜貫通領域と高い相同性が見られた。クローン化したcDNAをプローブに用いてノーザン解析を行いリアノジン受容体遺伝子の転写産物の大きさを求めたところ、哺乳類と同様に約15kbであった。2)遺伝子座位の決定と突然変異体:線虫の全染色体を含む、YACライブラリーを検索して、線虫のリアノジン受容体遺伝子を物理的染色体地図上の第V染色体左側に位置づけた。物理的染色体地図上から推定した遺伝子座位に突然変異体は単離されてなかった。ゲノムサザン解析の結果から、線虫には唯一個のリアノジン受容体遺伝子があるものと思われる。3)遺伝子DNAの解析:物理的染色体から予測されるコスミドクローンをイギリスのMRC分子生物学研究所から取り寄せ、遺伝子DNAを3'末端から順次塩基配列を決定し、約16kbの遺伝子構造を明らかにした。エクソン部分から推定したアミノ酸配列と哺乳類のリアノジン受容体のアミノ酸配列とを比較したところ膜貫通領域のみならず足構造部分にも高い相同性が見られた。繰り返し配列やATP結合領域など機能部位の解析を進めている。4)リアノジン受容体の抗体作成:クローン化したcDNAをlad-Z遺伝子の下流に読み枠をそろえてつなぎ、大腸菌内で発現させb-ガラクトシダーゼとの融合蛋白質を単離精製して抗体を作成中でる。

ウサギのリアノジン acceptor cDNA fragment をいて, nematode nematode のリアノジン acceptor remains のcDNA のmembrane penetration field をクローン化した. The position of the left side of the V chromosome on the chromosomal map of Nematode elegans is the correct position. Analyze して, about 60% (16kb) of the のリアノジン recipient body remains 伝子structure を明らかにした.なお、クローン化した nematode のcDNAは无発表のstage でショウジョThe body of the ウバエのリアノジン body remains is given to された. 1) Analysis of the same cDNA code of the written product: cDNA code The base arrangement determines the high homogeneity in the film penetration area of the acceptor and the fluorophore.クローン化したcDNAをプローブにいてノーザン ANALYZED を行いリアノジン acceptor The product of the remaining written product is の大きさを久めたところ and mammal と同様に, which is about 15kbであった. 2) Determination of genetic locus and sudden mutation: C. elegans full chromosome, YAC chromosomeて, nematode's receptor body is located on the left side of the V chromosome on the physical chromosome. The location of the physical chromosome is presumed to be the same as that of the remaining chromosomes, and the chromosomes are suddenly separated from each other.ゲノムサザンanalytic result から, nematode には the only のリアノジン accepted body remains 伝子があるものと思われる. 3) Analysis of genetic DNA: Physical chromosome analysis MRC Institute of Molecular Biology The 3' end of the DNA is determined by the order of sequence, and the structure of the DNA is about 16kb. Part of the エクソンから presumed したアミノ acid complex and mammalian のリアノジン acceptor のアミノ acid complex The comparison of the column and the structure of the membrane penetration area is high and the similarity is high. The analysis of the functional parts of the ATP binding domain and the analysis of the functional parts of the ATP binding field are carried out. 4) Preparation of リアノジン receptor antibody: クローン化したcDNAをlad-Z 伝子の流にみ枠をそろえThe fusion protein of てつなぎ, the で発 in the coliform bacteria is now させb-ガラクトシダーゼとの is isolated and purified and the して antibody is produced in 中でる.