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普遍的転写因子TBPと相互作用してその活性を調節する核内因子の解析

与通用转录因子 TBP 相互作用并调节其活性的核因子分析

基本信息

批准号：
05273217
负责人：
田村隆明
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05273217/
关键词：
TBP 転写制御 TAF

项目摘要

タンパク質をコードする遺伝子はPolIIにより転写されているが、その転写量は種々のDNA結合能を持つ転写調節因子により調節されている。これら転写因子の標的はTBPであるが、TBPは直接活性化シグナルを持け取らず、TAFと呼ばれる因子が、そのシグナルを伝達する。TAFは発生・分化・増殖というような様々な生命活動にかかわる転写調節に深く関与すると考えられ、本研究においては、動物個体組織からTAFを得る新たな実験系の確立を目ざした。マウスTBPのN端にヒスチジンのタグを付けたものを大腸菌で大量発現させ、Ni-アガロースで純品に精製した。別にラットの肝臓より核抽出液を大量に調製した。ヒスチジンタグ付TBP(HXmTBP)と核抽出液を混合し、これをNi-agaroseを通す事によりHXmTBPに結合する核内タンパク質(TBP結合性蛋白質:TIPs)をSDS-PAGEで検出した。その結果、核抽出液には多数のTIPsが含まれている事が明らかになった。抗マウスTBP抗体を用いて核抽出液内のTFIID複合体を解析したところ、TIPsのかなりのものはTAFとして分類される因子と同一である事が考えられた。このTIPsを得る時、熱処理を行なうと、かなりのTIPsは消失するが、残る分子も存在し、TIPsの中には、TBPに直接あるいは間接に様々な強さで結合するものが存在する事が明らかになった。肝以外に脳や腎,精巣などの核抽出液中のTIPsを解析したところ、「組織特異的」あるいは「増殖特異的」TIPsの存在が示唆された。

In order to improve the performance of the PolII, the combination of various kinds of DNA can be used to improve the performance of the system. In order to write the factor, the TBP, the TBP, the direct activation, the data acquisition, the TAF, the driver, the driver, the driver TAF biological differentiation, biological differentiation, biological activities, life activities, writing, in-depth studies and studies, this study aims to improve the quality of life, and to establish an objective in this study. In this study, we have obtained new information on the development of animal organizations such as TAF. The N-terminal of the TBP has a large number of bacteria, while the Ni- has a large number of products. Don't tell me about the amount of fluid extracted from the liver. Make sure that TBP (HXmTBP) is used to mix the nuclear extract, and that the HXmTBP is used in combination with the HXmTBP (TBP binding protein: TIPs) SDS-PAGE to extract the liquid. The results showed that most of the TIPs of the nuclear extract contained specific information. The anti-viral TBP antibody was analyzed by TFIID complex in the nuclear extract solution, and the TIPs protein was analyzed. The TAF antibody was classified into two categories: the same factor and the same factor. When the TIPs is obtained, the TIPs will disappear, the residual molecule will exist, the TIPs will be detected, and the TBP will be connected directly. There is an emergency response in the combination of the two. Outside the liver, the presence of TIPs in the nuclear extract was analyzed by TIPs assay, and the presence of TIPs in the tissue-specific DNA was detected.