エンド型グリコシダーゼを用いた糖鎖の再構築とその再構築糖鎖のタンパク質への導入

使用糖苷内切酶重建糖链并将重建的糖链引入蛋白质中

• 批准号: 09240202
• 负责人: 遠藤 正彦
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Hirosaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09240202/
• 关键词: エンド型グリコシダーゼ; 糖鎖再構築; 糖鎖のタンパク質への導入; 生理活性ドメイン; 糖鎖導入のキャリヤ-; 4-メチルウンベリフェロン誘導糖鎖; 糖鎖組み換え; ヒアルロニダーゼ

研究の目的:遺伝子工学的に産生される糖鎖欠落のコンビナントタンパク質の欠点を補うために、プロテオグリカンをモデルとして、グリコサミノグリカンから生理活性を有する糖鎖を、グリコシダーゼ糖転移活性を用いて合成し、これをリコンビナントタンパク質に導入するという技術の開発を目標としている。研究の経過:1.糖鎖再構築の反応条件の確立:エンド型グリコシダーゼとしての精巣性ヒアルロニダーゼ加水分解の逆反応としての糖鎖転移(再構築)活性が検討された。その結果、一つの好条件が見い出された(Tris-HCl緩衝液、pH7.0Naclを含まない)。2.糖鎖再構築のためのドナーの検討:糖鎖再構築の際のドナーの条件が検討され、ヒアルロン酸、コンドロイチン、コンドロイチン4-硫酸、及び6-硫酸の順に転移されやすいことが知られた。3.糖鎖のアグセプターの検討:先のドナーと同じ順に良いアクセプターであった。4.糖鎖の任意の組み換え:上記の4種類の糖鎖の二糖単位を非還元末端位に有する糖鎖をドナーまたはアクセプターとした場合、これらの任意の組み合せによる糖鎖の再構築が可能になった。5.再構築糖鎖のペプチドへの導入:糖鎖のペプチドへの導入に有効なエンド-β-キシロシダーゼが以前当研究組織により発見されている。この導入のためのキャリヤ-検索が進められている。今後の課題:ヒアルロニダーゼの糖転移活性を用いる生理活性ドメイン構造の酵素的合成法の確立と、ペプチドへの位置選択的な導入が次なる課題である。

The purpose of this study is to develop a new technology for the generation of genetic engineering, which is to improve the quality of sugar chain, improve the physiological activity of sugar chain, improve the synthesis of sugar chain and improve the quality of sugar chain. 1. The establishment of conditions for the reverse transformation of glycan remodeling: the activity of glycan remodeling was investigated. The results and the best conditions were obtained (Tris-HCl buffer, pH 7.0 Nacl). 2. A discussion of the possible conditions for the formation of sugar chains: The possible conditions for the formation of sugar chains were discussed, and the possible conditions for the formation of sugar chains were discussed. The possible conditions for the formation of sugar chains were discussed. 3. A discussion of sugar lock's lost position: the first choice is the same as the first choice. 4. Any combination of sugar locks: The four types of sugar locks listed above have a disaccharide position, a non-reductive terminal position, and a sugar lock that can be reconstructed from any combination. 5. Re-construction of carbohydrate selection strategy: the introduction of carbohydrate selection strategy has been developed in the past research organizations. This is the first time I've ever seen a woman. Future issues: establishment of enzyme synthesis method for the physiological activity of glucose transfer in the medium of glucose transfer activity, and introduction of selective site selection.

项目成果

Takagaki,K.et al.: "Ion-spray mass spectromentry for identification of the nonreducing terminal sugar of glycosaminoglycan." Glycoblology. 8(印刷中). (1998)

Takagaki, K. 等人：“用于鉴定糖胺聚糖的非还原性末端糖的离子喷雾质谱法。”Glycoblology 8（出版中）。

Tazawa,T.et al.: "A novel 4-methylumbelliferyl-β-D-xyloside derivative,sulfate-0-3-xylosyl β1-(4-methylumbelliferone),isolated from culture medium of human skin fibroblasts,and its role in methylumbelliferone-initiated glycosaminoglycan biosynthesis." Gly

Tazawa, T. 等人：“一种新型 4-甲基伞形基-β-D-木糖苷衍生物，硫酸盐-0-3-木糖基 β1-(4-甲基伞形酮)，从人皮肤成纤维细胞的培养基中分离出来，及其在甲基伞形酮引发的糖胺聚糖生物合成。”Gly

Tanaka,K.et al.: "Regulation of hyaluronate metabolism by progesterone in cultured skin fibroblasts from the human uterine cervix." FEBS Letters. 402. 223-226 (1997)

Tanaka,K.等人：“黄体酮对人宫颈培养皮肤成纤维细胞中透明质酸代谢的调节。”

Takagaki,K.et al.: "Characterization of β-D-xyloside-initiated glycosaminoglycan synthesized by human skin fibroblasts in the presence of tunicamycin." Glycoconjugate Jounal. 15(印刷中). (1998)

Takagaki, K. 等人：“在衣霉素存在下由人皮肤成纤维细胞合成的 β-D-木糖苷起始糖胺聚糖的表征”，糖结合物杂志 15（出版中）。

Yasukochi,T.et al.: "Enzymatic synthesis of 4-methylubelliferyl glycosides of trisaccharide,and core tetrasaccharide,Gal(β1-3)Gal(β1-4)Xyl and GlcA(β1-3)Gal(β1-3)Gal(β1-4)Xvl,corresponding to the linkage region of proteoglycans." Buil.Chem.Soc.Jpn.70. 271

Yasukochi, T. 等人：“三糖和核心四糖、Gal(β1-3)Gal(β1-4)Xyl 和 GlcA(β1-3)Gal(β1-3)Gal 的 4-methylubelliferyl 糖苷的酶促合成(β1-4)Xvl,对应于蛋白多糖的连接区域。" Buil.Chem.Soc.Jpn.70. 271