权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

エンド型グリコシダーゼを用いた糖鎖の再構築とその再構築糖鎖のタンパク質への導入

使用糖苷内切酶重建糖链并将重建的糖链引入蛋白质中

基本信息

批准号：
10134203
负责人：
遠藤正彦
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Hirosaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1. 研究の目的:遺伝子工学的に産生されるリコンビナントタンパク糖鎖欠損の輪という欠点を補うため、プロテオグリカンをモデルに、エンド型グリコシダーゼの糖転移活性を利用して、天然のグリコサミノグリカンから生物活性を有する糖鎖に組み換え、これをリコンビナントのタンパク質に導入する方法を確立する。2. 研究の成果:1)エンド型グリコシダーゼとしてのヒアルロニダーゼを用いた糖転移活性の至適条件、糖鎖の供与体及び受容体の条件が既に検討されているが、これを補充し、確立した。2)任意にデザインされた糖鎖配列を、組み換え法で作製する条件が検討された。その結果、(1)ヒアルロン酸とコンドロイチン硫酸かも非天然型の糖鎖が、(2)コンドロイチン硫酸と脱硫酸化デルマタン硫酸から天然の各種のドメイン構造の基本的糖鎖の組み換えが可能になった。3)ヒアルロニダーゼにより産生された組み換え糖鎖の化学構造を決定する方法の一つとして、質量分析装置により、糖鎖の還元末端糖鎖を同定する方法が確立された。4)糖鎖をペプチドへ導入するためのキャリヤーが検討された。培養細胞の培地に4-メチルウンベリフェリル.β-キシロシドを添加して培養すると、これをプライマーとして伸長する糖鎖が有効であった。5)糖鎖のタンパク質への導入に有効なエンド-β-キシロシダーゼのクローニングに向けての精製が進んでいる。3. 今後の課題:生物活性を有するより複雑な糖鎖構造を作製するために、糖鎖中により過剰な硫酸基の導入方法の確立、及び糖鎖をタンパク質に位置選択的に導入する方法の検討が必要である。

1. The purpose of this study is to establish a method for the generation of genetic engineering, the utilization of sugar transfer activity, the introduction of natural sugar chain components, and the introduction of sugar chain components. 2. The results of this study are as follows:1) The optimal conditions for the sugar transfer activity, the donor and acceptor conditions of sugar chain were discussed, and the optimal conditions were established. 2) Any conditions for the selection of sugar lock pairs and the selection of sugar lock pairs are discussed. The results are as follows: (1) The basic sugar chain of natural and various kinds of structure can be replaced by natural sugar chain of natural and various kinds of structure. 3) A method for determining the chemical structure of the carbohydrate chain was established. A mass analysis device was used to determine the chemical structure of the carbohydrate chain. 4)The café for selecting the sugar lock to import is available for discussion. Cultured cells are cultured in 4-cell culture medium.β-glucagon 5)The introduction of sugar chains into the production process has the potential to improve the production process. 3. Future issues: establishment of a method for introducing sulfate groups into a carbohydrate chain, and a method for selecting the position of a carbohydrate chain.