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転写活性化因子PhoBの機能解析

转录激活子PhoB的功能分析

基本信息

批准号：
09249213
负责人：
牧野耕三
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

大腸菌では培地中のリン酸欠乏によりPhoBに依存して転写誘導のおこる31個以上の遺伝子群があり、これらは総称してリン酸レギュロンと呼ばれている。これら遺伝子群のプロモーター領域には229個のアミノ酸から成る転写活性化因子PhoBのDNA結合認識配列であるリン酸ボックスが存在している。このリン酸レギュロンの発現を特異的に減少させるRNAポリメラーゼ変異体の分離に成功し、転写活性化におけるPhoBとRNAポリメラーゼの蛋白質・蛋白質の相互作用点を明らかにできた。その変異部位はRNAポリメラーゼのσ^<70>サブユニットのhelix-turn-helix上の第一helixにあった。また、σ^<70>サブユニットの第一helixに部位特異的変異の導入を行い、各種の変異型σ^<70>を分離精製しin vitro転写実験をおこなった結果もこの領域がPhoBとの相互作用点であることを支持した。つぎにリン酸レギュロンの転写促進因子PhoBについては、N-末端側(リン酸受容ドメイン)がC-末端側の転写活性化ドメインの機能を制御していること、またC-末端側の転写活性化ドメインにはDNA結合(リン酸ボックスとの結合)とRNAポリメラーゼとの相互作用という少なくとも2つのサブドメインがあること、DNA結合モチーフはHTHでありリン酸ボックス内のTGNCA配列を認識していること等を明らかにした。さらに、PhoBとRNAポリメラーゼとの相互作用には、PhoBのHTHモチーフのTurn構造とRNAポリメラーゼのシグマ70因子のHTHの第1Helixが使われていることや、PhoBがリン酸ボックスに結合するとDNAは彎曲するすることを明らかにした。

Coliform bacteria have more than 31 genes that are dependent on the enzyme to induce acid deficiency. 229 active factors were identified in the DNA binding recognition sequence of PhoB in the field of gene expression. The protein interaction site of the RNA molecule was identified. The <70>first helix on the helix-turn-helix is the first helix on the helix-turn-helix The <70>first helix is a site-specific variant, and the second helix is a site-specific variant<70>. PhoB is the promoter of the reaction between acid and N-terminal side. The function of the C-terminal-side transcription activation gene is controlled by DNA binding. The interaction between RNA and TGNCA is very important. The interaction between RNA and TGNCA is very important. PhoB and RNA molecules interact with each other, PhoB and RNA molecules interact with each other,