転写活性化因子PhoBの機能解析

转录激活子PhoB的功能分析

• 批准号: 07268213
• 负责人: 牧野 耕三
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07268213/
• 关键词: 転写活性化因子; PhoB; リン酸レギュロン; リン酸ボックス; RNAポリメラーゼ; σ^<70>サブユニット; DNA結合; PCR mutagenesis

大腸菌では培地中のリン酸欠乏によりPhoBに依存して転写誘導のおこる31個以上の遺伝子群がありこれらは総称してリン酸レギュロンと呼ばれている。これら遺伝子群のプロモーター領域には転写活性化因子PhoBのDNA結合の認識配列であるリン酸ボックスが存在している。PhoBとRNAポリメラーゼの蛋白質・蛋白質の相互作用点を明らかにするためリン酸レギュロンの発現を特異的に減少させるRNAポリメラーゼ変異体の分離に成功した。その変異部位はRNAポリメラーゼのσ^<70>サブユニットのhelix-turn-helix上の第一helixにあり、この領域でPhoBとの蛋白質・蛋白質の相互作用に関与している可能性が高いことが示唆された。また、σ^<70>サブユニットの第一helixに部位特異的変異の導入を行い、この部位でのPhoBとの蛋白質・蛋白質の相互作用を確認した。さらに、PhoBとRNAポリメラーゼのリン酸レギュロンプロモーター上での蛋白質・蛋白質の相互作用をさらに明らかにするためにPCR mutagenesis法によりRNAポリメラーゼと相互作用できなくなったと考えられるPhoB変異体の分離を行なった。その部位がPhoB上のある特定領域に集中しており、この領域がRNAポリメラーゼとの相互作用点と考えられた。

Coliform で は in petty の リ ン acid owe lack に よ り PhoB に dependent し て planning write induced の お こ る more than 31 の heritage 伝 subgroup が あ り こ れ ら は 総 said し て リ ン acid レ ギ ュ ロ ン と shout ば れ て い る. こ れ ら heritage 伝 subgroup の プ ロ モ ー タ ー field に は planning write activation factor PhoB の dna-binding の meet with column で あ る リ ン acid ボ ッ ク ス が exist し て い る. PhoB と RNA ポ リ メ ラ ー ゼ の の protein, protein interaction points を Ming ら か に す る た め リ ン acid レ ギ ュ ロ ン の 発 を specific に now reduce さ せ る RNA ポ リ メ ラ ー ゼ - variant の separation に successful し た. そ の - different parts は RNA ポ リ メ ラ ー ゼ の sigma ^ < 70 > サ ブ ユ ニ ッ ト の helix - turn - helix の first helix に あ り, こ の field で PhoB と の の protein, protein interaction に masato and し て い likely が る い こ と が in stopping さ れ た. ま た, sigma ^ < 70 > サ ブ ユ ニ ッ ト の first helix に site specific - different の import を い, こ の parts で の PhoB と の の protein, protein interaction を confirm し た. さ ら に, PhoB と RNA ポ リ メ ラ ー ゼ の リ ン acid レ ギ ュ ロ ン プ ロ モ ー タ ー on で の の protein, protein interaction を さ ら に Ming ら か に す る た め に PCR Mutagenesis method に よ り RNA ポ リ メ ラ ー ゼ と interaction で き な く な っ た と exam え ら れ る PhoB - variant の separation line を な っ た. が そ の parts on the PhoB の あ る に specific areas concentrated し て お り, こ の field が RNA ポ リ メ ラ ー ゼ と の interaction points と exam え ら れ た.

项目成果

Kim,S.-K.: "Mutational analysis of the first helix of region 4.2 of the σ^<70> subunit of Escherichia coli RNA polymerase in transcriptional actation by activator protein PhoB." Mol.Gem.Gent.248. 1-8 (1995)

Kim, S.-K.：“激活蛋白 PhoB 转录激活过程中大肠杆菌 σ^<70> 亚基 4.2 区第一螺旋的突变分析。” 8 (1995)

Miura,I.: "Analysis of the tyrosinase gene of the Japanease pond frog, Rananigromaculata: cloning and nucleotide sequence of the genomic DNA containig the tyrosinase gene and its flanking regions." Jpn. J. Genet.70. 79-92 (1995)

Miura,I.：“日本池蛙 (Rananigromaculata) 酪氨酸酶基因的分析：含有酪氨酸酶基因及其侧翼区域的基因组 DNA 的克隆和核苷酸序列。”

牧野耕三: "Bio Science用語ライブラリー:転写因子" 羊土社, 213 (1995)

Kozo Makino：“生物科学术语库：转录因子”Yodosha，213（1995）

Suzuki,M.: "The DNA binding dimains of transcription factors, PhoB and OmpR, adopt the same folding as that of histone H5 and bind to RNA polymerase using the ends of two α-helices." Proc.Japan Acad.71B. 132-137 (1995)

Suzuki,M.：“转录因子 PhoB 和 OmpR 的 DNA 结合结构采用与组蛋白 H5 相同的折叠方式，并利用两个 α 螺旋的末端与 RNA 聚合酶结合。” -137 (1995)

Hiratsu,K.: "The rpoE gene of Escherichia coli, which encods σ^E,is essential for bacterial growth at high temperature." J. Bacteriol.177. 2918-2922 (1995)

Hiratsu, K.：“大肠杆菌的 rpoE 基因编码 σ^E，对于细菌在高温下的生长至关重要。”J. Bacteriol.177（1995）。