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ジーンターゲッティングによる交感神経節VIP/PACAP受容体シグナルの機能解析

基因打靶对交感神经节 VIP/PACAP 受体信号的功能分析

基本信息

批准号：
09273238
负责人：
馬場明道
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09273238/
关键词：
VIP PACAP 受容体交換神経ジーンターゲッティング

项目摘要

VIP/PACAPは脳、副腎や膵臓をはじめとする臓器において種々の重要な生理機能を持つニューロペプチドであり、その受容体は少なくとも3種類が存在している。各受容体サブタイプの各臓器(部位)における発現分布はそのリガンドと同様異なった分布をする。従って、各々の臓器での機能と個別のシグナル系の関連は不明である。われわれは、VIP/PACAPの生理機能を解明することを目的として以下の検討を行った。(1)副腎髄質および上頸神経節におけるVIP、PACAPとそれらの3種類の受容体のmRNA発現の分布を、^<35>S-標識アンチセンスRNAプローブを用いたin situ hybridization法により調べた。その結果、PACAPおよびPACAP受容体が共発現する細胞が存在し、PACAPがオートクリン因子として働く可能性が示唆された。(2)リガンド分子と結合し、細胞内シグナル系を活性化させる受容体領域について解析を行う目的で、VIP受容体およびPACAP受容体のキメラ受容体cDNAを作製し、COS細胞発現系を用いて、^<125>I-PACAPおよび^<125>I-VIP結合および細胞内cAMP産生(受容体活性化)について調べた。その結果、VIP/PACAP受容体のリガンド結合とシグナル活性化に関するドメイン構造が明らかとなり、これらの2つのドメインは機能的に完全に分離して考えることができる、2-サイトモデルであてはまることが示された。(3)PACAP受容体にHAエピトープの配列を導入した受容体(HA受容体)を作製した。HA受容体は野生型受容体と同等の機能を有しており、免疫組織化学によって検出できることを確認した。(4)PACAP受容体ノックアウトマウスの作製。PACAP受容体遺伝子DNAを用いてターゲッティングベクターを作製し、ES細胞D3株の相同組換え体から、PACAP受容体ノックアウトマウスを得て、現在その解析を行っている。

VIP/PACAP has three kinds of important physiological functions, namely, kidney, kidney and kidney. The occurrence distribution of each receptor is different from that of the same receptor. The function of each device is unknown. The physiological functions of VIP/PACAP are discussed below. (1)The distribution of mRNA expression in three kinds of <35>receptors in pararenal cortex and upper cervical cortex was studied by using the method of in situ hybridization. As a result, PACAP and PACAP receptors co-exist, and PACAP has a high probability of co-occurrence. (2)For the purpose of molecular binding, activation of intracellular receptor system, analysis of receptor domain, preparation of receptor cDNA for VIP receptor and PACAP receptor, use of COS cell development system, modulation of intracellular <125><125>cAMP production (receptor activation) and binding of I-PACAP and I-VIP. As a result, VIP/PACAP receptors are separated completely from each other in terms of the structure and function of the receptor. (3)PACAP receptor HA ligand is introduced into the receptor (HA receptor). HA receptor is functionally equivalent to wild-type receptor and confirmed by immunohistochemistry. (4)PACAP receptor system. PACAP receptor DNA is used to produce and analyze the same components of ES cell line D3.