Gene Therapy for ALS with mutant SOD1 by ribozyme and catalytic DNA.

通过核酶和催化 DNA 使用突变型 SOD1 进行 ALS 基因治疗。

• 批准号: 14570582
• 负责人: YOKOTA Takanori
• 金额: $ 2.56万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14570582/
• 关键词: siRNA; RNAi; Gene therapy; SOD1; ribozyme; catalyticDNA; virus vector; ウイルスベクター; DNAエンザイム; SODI; カタリテックDNA; アデノウイルスベクター; G93Aトランスジェニックマウス; SOD; 筋萎縮性側索硬化症

Recently, short interfering RNA (siRNA) has been found to cleave efficiently RNA, so that we compared its efficiency for the supprresion of expression of target gene with ribozyme and catalytic DNA. In culture cells the siRNA designed for wild-type SOD1 was much more efficient to suppress the expression of SOD1 than ribozyme and catalytic DNA. When single nucleotide alternation was positioned at 9-13th nucleotide from 5' side in the sense sequence of siRNA, it can recognize a single nucleotide alternation. Using this principle, we succeeded in making the siRNA which specifically suppress the expression of mutant G93A SOD1 without influencing that of the wild-type SOD1.For the efficient delivery of siRNA to neurons, development of the virus vectors might be necessary. First, excellent siRNA-expressing DNA vector was constructed when the U6 promotor and the stem-loop sequence of siRNA were used. Second, with this expression cassette, we successfully made siRNA-expressing adnovirus and adno-associate virus vectors. Therefore, we finish the first step of the gene therapy for ALS with mutant SOD1.

近年来发现短干扰RNA（short interfering RNA，siRNA）可以有效地切割RNA，因此我们比较了它与核酶和催化DNA对靶基因表达的抑制效果。在培养细胞中，针对野生型SOD 1设计的siRNA比核酶和催化DNA更有效地抑制SOD 1的表达。当单核苷酸改变位于siRNA有义序列中自5'侧起第9- 13个核苷酸时，它可以识别单核苷酸改变。利用这一原理，我们成功地制备了特异性抑制突变型G93 A SOD 1表达而不影响野生型SOD 1表达的siRNA。首先，利用U6启动子和siRNA的茎环序列，构建了siRNA的高效表达载体。其次，利用该表达盒，我们成功地制备了表达siRNA的腺病毒和腺相关病毒载体。因此，我们完成了突变型SOD 1基因治疗ALS的第一步。

项目成果

Yokota T, et al.: "Inhibition of intracellular hepatitis C Virus replication by synthetic and vector-derived small interfering RNAs"EMBO rep. 4(6). 602-608 (2003)

Yokota T 等人：“通过合成和载体衍生的小干扰 RNA 抑制细胞内丙型肝炎病毒复制”EMBO 代表。

横田隆徳: "RNAiを用いたウイルス性肝炎の遺伝子治療"医学のあゆみ. 208(7). 485-491 (2004)

Takanori Yokota：“利用 RNAi 进行病毒性肝炎的基因治疗”，《医学史》208(7) (2004)。

横田隆徳: "RNAiによる神経変性疾患の遺伝子治療をめざして"遺伝子医学. 7(3). 349-354 (2003)

Takanori Yokota：“利用 RNAi 进行神经退行性疾病的基因治疗”遗传医学 7(3)。

Li Y, et al.: "siRNA-based inhibition of Mutant ataxin3 gene expression : potential use for gene therapy of Machado-Joseph disease"Annals of Neurology. (印刷中).

Li Y 等人：“基于 siRNA 的突变 ataxin3 基因表达抑制：马查多-约瑟夫病基因治疗的潜在用途”《神经学年鉴》（Annals of Neurology）（出版中）。

Yokota T, et al.: "Inhibition of intracellular hepatitis C rims replication by synthetic and vector-drived small interfering RNAs"EMBO report. 4・6. 602-608 (2003)

Yokota T 等人：“合成和载体驱动的小干扰 RNA 抑制细胞内丙型肝炎病毒复制”EMBO 报告 4・6 (2003)。