1型糖尿病の発症に関わる転写因子T-betの機能解析とその転写制御に関する研究

1型糖尿病发病相关转录因子T-bet的功能分析及其转录调控研究

• 批准号: 14570751
• 负责人: 黒丸 龍一
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14570751/
• 关键词: T-bet; 1型糖尿病; 遺伝子多型; 転写活性

T-bet遺伝子His33Gln多型による転写活性の変化我々は以前の研究で1型糖尿病とT-bet遺伝子His33Gln多型の関連を解析した。その結果、日本人1型糖尿病群においてはGln33多型の頻度がコントロール群と比較して統計学的に有意に高いということをはじめて発見した。今回あらたに、T-bet遺伝子His33Gln多型が日本人1型糖尿病の発症に影響を与える分子機序を明らかにするため、同遺伝子多型にともなうT-betタンパク質の転写活性の変化を検討した。まず、健常人ボランティアより末梢血リンパ球を分離、培養後、刺激にて活性化しRNAを抽出た。RT-PCR法によりT-bet遺伝子のタンパク翻訳領域を増幅し、つぎにPCR産物をc-Mycとの融合タンパクとして発現できるベクターpCMV-Tagにサブクローニング後、シークエンス法によりHis33とGln33多型のクローンを選別した。2種類のT-bet(T-bet His33とT-bet Gln33)を発現するプラスミド(pTbet-His33およびpTbet-Gln33)を作成するとともに、T-boxタンパク質が結合するDNA塩基配列を有するIFNγ遺伝子プロモーターの下流にルシフェラーゼ遺伝子翻訳領域を挿入したIFN-γルシフェラーゼリポータープラスミドを準備した。それぞれのT-bet発現プラスミド(T-bet His33またはT-bet Gln33)とともにIFN-γルシフェラーゼリポータープラスミドをHeLa細胞にリポフェクション法にて導入し、12時間後にそれぞれの転写活性をデュアル・ルシフェラーゼアッセイ法で解析した。その結果、T-bet Gln33はT-bet His33よりも有意に高い転写活性を示した(p=0.0001、Student's t検定)。このことは、T-bet遺伝子His33Gln多型がIFN-γ遺伝子の発現に影響を与える機能的多型であることを示している。すなわち、T-bet Gln33多型は、T細胞におけるIFN-γ発現を誘導する機序を介して日本人の1型糖尿病の発症に関与しているものと考えられる。

The T-bet legacy His33Gln polytype has been studied in the past and the relationship between the His33Gln polytype and the T-bet legacy His33Gln polytype has been analyzed.その results, Japanese type 1 diabetes group においてはGln33 polytype のfrequency がコントロール群とComparisonしてstatisticsに有愿に高いということをはじめて発见した. This time, T-bet's His33Gln polytype, the influence of Japanese type 1 diabetes mellitus, and its molecules Machine sequence を明らかにするため, same inheritance 伝子多type にともなうT-betタンパクquality の転WRITING ACTIVE の変化を検した. After separating and culturing the ボランティアより peripheral blood リンパballs of healthy people, the RNA that stimulates the activation of にて is extracted. RT-PCR method, T-bet legacy のタンパクtranslation field, をamplification, つぎにPCR product をc-Myc とのfusion タンパクとして発appearできるベクターpCMV-Tagにサブクローニング后、シークエンス法によりHis33 and Gln33 polytype のクローンを选选した. 2 types of T-bet (T-bet His33とT-bet Gln33)するプラスミド(pTbet-His33およびpTbet-Gln33)を成するとともに、T-boxタンパク性がcombinationするDNA婩 Based arrangement を有するIFNγ伝子プロモーターのdegradable にルシフェラーゼ伝子译訳区をinsertしたIFN-γルシフェラーゼリポータープラスミドを READYした. T-bet His33またはT-bet Gln33) とともにIFN-γルシフェラーゼリポータープラスミドをHeLa cell にリポフェクション法にて Import し, 12 hours later にそれぞれの転WRITE active をデュアル・ルシフェラーゼアッセイ法でanalytic した.そのRESULTS, T-bet Gln33はT-bet His33よりもThe result is high and the writing activity is high (p=0.0001, Student's t検determination). T-bet's His33Gln polytype IFN-γ's His33Gln polytype IFN-γ's polytype T-bet's polytype T-bet's polytype T-bet's His33Gln polytype IFN-γ's polytype T-bet's polytype T-bet's polymorphism that affects the function of the に and える functions.すなわち、T-bet Gln33 polytype, T cells are induced by IFN-γ, the mechanism is introduced, and the Japanese type 1 diabetes mellitus is related to the disease.