シスチン尿症の遺伝子診断法の確立

胱氨酸尿症基因诊断方法的建立

• 批准号: 14571484
• 负责人: 溝口 研一
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14571484/
• 关键词: シスチン尿症; BAT1遺伝子; r-BAT遺伝子

1.ヒトBAT1染色体遺伝子のクローニングおよびBAT1ヒトゲノムのエクソン-イントロン構築の決定(患者解析の準備):ヒトBAT1遺伝子(cDNA)をプローブとしてヒトgenomic DNA libraryからクローニングをおこない全長のシークエンスを解析した。この塩基配列をcDNAの塩基配列と照らし合わせることによりエクソン-イントロン境界を決定した。エクソン-イントロン境界の構築により患者末梢血より抽出した染色体のダイレクトシークエンスによる遺伝子変異解析が可能となった。rBAT遺伝子についてはすでにゲノム構造が公表されている。2.患者解析:シスチン尿症42症例の患者末梢血は患者の同意および院内倫理委員会の承認を得て準備した。患者の末梢血より染色体DNAを抽出し1で明らかとなったエクソン領域にせ設定したプライマーをもちいてPCR法で増幅したのちダイレクトシークエンスをおこないBAT1遺伝子の変異の有無、内容を検討した。r-BAT遺伝子についてもすでに公表されているゲノム構造をもとにプライマーを作成し同様の手法により解析をおこなった。同時に健常人ボランティア50名の血液検体を収集し健常人ついてもr-BAT、BAT1遺伝子のシークエンスをおこないpolymorphismの有無を検討し患者に見いだされた変異から除外することとした。現時点で42症例中27名のシスチン尿症患者につきrBATおよびBAT1遺伝子変異の検索を行った結果27症例中5例に5種類のrBAT変異、22例に6種類のべ26個のBAT1遺伝子変異が検出された。今後残る15検体の解析を完したのち検出した変異遺伝子の機能解析をおこない疾患の責任遺伝子であることを証明する予定である。

1. Determination of BAT-1 chromosome sequence (preparation for patient analysis): BAT-1 gene (cDNA) sequence analysis of genomic DNA library. The base alignment of cDNA is determined by the base alignment of cDNA. The analysis of chromosome diversity in peripheral blood of patients is possible. The rBAT gene has to be constructed in the public domain. 2. Patient analysis: 42 cases of urinary disorders, peripheral blood, patient consent and hospital ethics committee recognition were prepared. The chromosome DNA of the patient's peripheral blood was extracted from the patient's peripheral blood and the content of the chromosome was examined. r-BAT Genome is a public domain name. It is a public domain name. At the same time, 50 healthy people's blood samples were collected from healthy people, including r-BAT and BAT1, and the presence or absence of polymorphism was discussed in patients. At present, 27 out of 42 patients with diabetes mellitus were found to have 5 types of rBAT and 26 types of BAT1 gene. In the future, the analysis of the residual body will be completed, and the functional analysis of the residual body will be completed.