血小板膜糖蛋白GPIaの構造と機能に関する研究

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本年度は、血小板の他にヒト臍帯静脈内皮細胞および巨核球celllineMEGO1(各大斉藤眞彦教授寄贈)において、Gpla/IIa複分体が発現しているか否かを検討した。また、Gplaに対するモノクローナル抗体を用いて、血小板、MEG01のコラーゲンに対する接着能の検討を行った。(1)内皮細胞のGpla/IIaの合成:metabolic label(^<35>S-メチオニンを用いた)した、内皮細胞に、GpIaのモノクローナル抗体(12F1,Dr Pisbul変贈)でimmumisolation を行うと、分子量140、118KD(非還元F)および155、135KD(還元F)の二つの蛋白がisolateされた。(2)MEG01において、同様にmetabolic label したものをIysateにし、12F1とA-1A5C GPIIaに対するモノクローナル抗体Dr Hemico寄贈)を用いてimmunobo lationを行った。その結果、MEG01をPMAで刺激後にGPIaが、刺激前後にGpIIaがisolateされた。Flow cyAometoyでも同様な効果が得られた。(3)血小板およびMEG01のコラーゲンへの粘着に対するGpIaモノクローナル抗体の影響:6F1(GpIaに対するモノクローナル抗体.Dr Coller寄贈)は、血小板のコラーゲンへの接着(Mg^nイオン存在下)を明らかに抑制した。またMEG01では、PMA刺激後のみに明らかにコラーゲン接着が(コラーゲンfyrcI〜Vで)認められた。この接着は6F1にて抑制された。以上よりGpIa/IIa複合体は血小板のみならず巨核球でもPMA利活後に膜上に発現され、内皮細胞でも膜に発現している事が判った。GpIa/IIa複合体が、血小板、巨核球においてもコラーゲン接着に関与している事が、この社会体のモノクローナル抗体を用いた事実上判明した。