血小板分子マーカーの測定に関する研究

血小板分子标志物测定研究

• 批准号: 04807170
• 负责人: 渡辺 清明
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04807170/
• 关键词: 血小板; 分子マーカー; グライコカリシン; GMP140

本研究では新たらしい血小板分子マーカーとしてグライコカリン(GC)とGPM140の2種類についてその臨床的測定と意義について検討した。下記の成果より両者は血詮,〓症の循環障害の把握に有用であった。1.GCおよびGMP140に対するモノクローナル抗体の作整。血小板の溶解液をWGA(wheat germ aggulutinin)のレクチンアフィニティークロマトグラフィーを行い、これをN-アセチルグルコーサミンで溶出し、WGA分画を得た。これを、マウス腹腔内に注入し、通常の方法でモノクローナル抗体を作整した。抗体の特異性は血小板をウエスタンブロット法にて展開し、確認した。その結果、GCに対する抗体2種類(PL52-4,WGA-3)とGMP140に対する抗体2種類(PL7-6,WGA-1)を得た。2.GCおよびGMP140のサンドイッチELISAによる測定。GCの測定はWGA-3抗体を固推化した96穴のマイクロプレートにサンプルを50μl添加し,37℃,1時間反応させた。ついで、POD(パルオキシダーゼ)標識PL52-4抗体50μlを加え、37℃,1時間反応させ,発色剤を加え,光電比色計で比色した。GMP140もWGA-1,PL7-6抗体を用い,同様の方法で測定した。3.GCおよびGMP140の血中濃度。正常人50名での検討では、正常値はGC1459±1020ng/mlGMP140,1676±650ng/mlであった。4.患者抗体での検討。GCは糖尿病患者で増加傾向を示し、血小板保存をすると上昇した。またGMP140は血栓性血小板減少性紫斑病,hemolyhic ureruic syndrme ARDSなどの患者で有意に高値を示したが、人工心肺,人工透析使用患者では変動しなかった。

This research is based on the new platelet molecule マーカーとしてグライコカリン (GC)とGPM140の2 types of clinical measurement and significance of について検 Discussion of した. The results mentioned below are useful for those who understand the symptoms of circulatory disorders and how to control them. 1. GC およびGMP140 に対するモノクローナル antibody is prepared. Platelet lysate WGA (wheat germ aggulutinin)のレクチンアフィニティークロマトグラフィーを行い, これをN-アセチルグルコーサミンでsoluble, WGA division drawing を得た. Intraperitoneal injection of これを, マウスにし, the usual method is でモノクローナルantibodies and した. The specificity of the antibody is developed and confirmed by the platelet detection method. As a result, 2 types of GC に対する antibodies (PL52-4, WGA-3) and 2 types of GMP140 に対する antibodies (PL7-6, WGA-1) were obtained. 2. Measurement of GC およびGMP140 のサンドイッチELISA による. For GC measurement, add 50 μl of WGA-3 antibody to the 96-hole 96-hole PTFE test solution and react with it at 37°C for 1 hour.ついで, POD (パルオキシダーゼ) labeled PL52-4 antibody 50μl をえ, 37℃, 1 time reaction させ, 発色剤を加え, photoelectric colorimeter colorimetry した. GMP140, WGA-1, and PL7-6 antibodies were used and measured using the same method. 3. Blood concentration of GCおよびGMP140. The normal values ​​for 50 normal people are GC1459±1020ng/mlGMP140 and 1676±650ng/ml. 4. Discuss the patient’s antibodies. GC has an increased tendency in diabetic patients and platelet preservation has increased.またGMP140 は Thrombotic thrombocytopenic purpura, hemolyhic ureruic syndrme ARDS などの patients are interested in に高値をshow したが, artificial heart and lung, artificial dialysis use patients では変动しなかった.

项目成果

M.Katayama,M.Handa H.Anbo,et al.: "A monoclonal antibody-based enzyme immunoussay for human GMP-140 /P-selction" Journal of Immunological Melhods. 153. 41-48 (1992)

M.Katayama，M.Handa H.Anbo，等人：“用于人 GMP-140 /P-选择的基于单克隆抗体的酶免疫分析”免疫学方法杂志。