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先天性血小板異常症の遺伝子解析

先天性血小板异常的遗传分析

基本信息

批准号：
03807155
负责人：
渡辺清明
金额：
$ 0.77万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03807155/
关键词：
先天性血小板機能異常症血小板無力症 DNA診断

项目摘要

先天性血小板機能異常症の簡易診断法としてDNA分析による方法が待たれている。本研究では,血小板機能異常症の代表的疾患である血小板無力症の遺伝子異常について検討した。対象:血小板無力症タイプI患者1名,タイプII患者2名につき検討した。方法:(1)DNA解析;高分子のジェノミックDNAはMillerらの方法に準じ行って抽出した。DNAと各種のプライマ-の組合せを用いTaqpolymeraseにてDNAthermal cyclerでタ-ゲット部位の増幅を行った。これを数種類のendonucleaseを用い,R FLPの検討を行い,一部はsequenceを行った。(2)血小板RNA解析;Chomzynskiらの方法に準じ,GIT法にてCsClクッションを用い分離した。これよりMMLV revuse transcriptaseにてcDNAを作成した。次いでDNAと同様の方法でタ-ゲット部位を増幅,分析を行った。結果:(1)DNA解析:3名の患者について,数種類のsenseーprimer,antisense prinerの組合せで,増幅をした。DNAを1.2%アガロ-スゲルで泳動し,EB染色をしたが,タ-ゲットの部位とほぼ同じ大きさのDNAが固定された。従って,3名の患者には大きなDNAのdeletionやinsertionはないと考えられた。(2)血小板RNA解析においても3名の患者で,特に大きな異常を検出しえなかった。以上,今回検討した3名の血小板無力症患者においては,明らかな遺伝子異常を検出できなかった。しかし,今後他の部位のプライマ-を組合せて実験を行うと共に,sequenceを行う考えである。

Simple diagnostic methods for congenital platelet dysfunction are still pending for DNA analysis. This study investigated the genetic abnormalities of thrombocytopenia, a representative disease of platelet dysfunction. Subjects: Thromboasthenia I 1 patient, Thromboasthenia II 2 patients Methods:(1)DNA analysis; high molecular weight; DNA Miller method for accurate extraction. DNA thermal cyclers are used to amplify DNA sequences. A number of endonucleases were used, and a number of sequences were used. (2)Platelet RNA analysis;Chomzynski's method is accurate, and GIT method is used to isolate CsCl. MMLV rev transcriptase cDNA was synthesized. The method of DNA analysis is to increase the amplitude of DNA. Results:(1)DNA analysis:3 patients were detected, several kinds of sense primer and antisense priner were detected, and the amplitude was increased. DNA was 1.2% stable,EB staining was stable, and DNA was stable. In addition, three patients were diagnosed with DNA deletion. (2)Platelet RNA analysis was performed in 3 patients, with large abnormalities detected. The above three patients with thrombocytopenia were examined today. In the future, his position will be changed.