膜内在性ADP-リボシル転移酵素による刺激伝達の調節に関する研究

膜内ADP-核糖基转移酶调节刺激传递的研究

• 批准号: 01641516
• 负责人: 上田 国寛
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-01641516/
• 关键词: ADP-リボシル化; 脱ADP-リボシル化; ホスホジェステラ-ゼ; ADP-リボシル化の阻害剤; ADP-リボシルトランスフェラ-ゼ; ビタミン; 不飽和脂肪酸; NAD

1.ADP-リボシル化および脱ADP-リボシル化酵素活性の測定法の改良-動物組織あるいは培養細胞の粗抽出液を用いて上記修飾および脱修飾酵素活性を測定する条件を検討した結果、多くの場合ホスホジエステラ-ゼ活性が非常に強く、これを阻害しないと他の酵素の基質や反応生成物が分解されて活性測定し難いこと、この阻害にはEDTA+AMP(各1mM)あるいはIMP(5mM)の添加が有効であることを見出だした。2.ADP-リボシル化の新しい阻害剤の発見-約200種の化合物について、ADP-リボシルトランスフェラ-ゼ(ニワトリ肝臓核および七面鳥赤血球から精製)とポリ(ADP-リボ-ス)シンテタ-ゼに対する阻害効果を、in vitro反応系を用いて調査した。その結果、既知の阻害剤と構造の全く異なる多数の強力な阻害剤の存在が明らかとなった。その中には、トリプトファンの天然の代謝産物や各種ビタミンおよびビタミン様物質とその誘導体(レチナ-ル、k_2,k_3,α-リポ酸、不飽和脂肪酸など)が含まれていた。また、これらの効果がそれぞれの酵素に特異的なものと共通なものに分かれることを見出だした。3.膜内在性ADP-リボシル化酵素とアクセプタ-の解析-ラット脳より単離した膜画分が[^<32>P]または[^<14>C]NADからADP-リボ-ス部分を濃度、時間依存度に酸不溶性画分にとりこむことを見出し、その測定系を確立した。アクセプタ-となるアミノ酸は、阻害剤や安定性からアルギニンと推定された。

1. Improvement of the ADP-リボシル化および ADP-リボシル化 enzyme activity assay method - animal tissue cultured cells The crude extract liquid was used to measure the activity of the modified demodification enzyme mentioned above, the conditions were measured, and the results were obtained in many cases. -The activity is very strong, the activity of the enzyme is very strong, and the substrate of the enzyme is blocked, and the reaction product is decomposed, and the activity of the enzyme is difficult to measure. The addition of EDTA + AMP (1mM each) and IMP (5mM) is effective and effective. 2.ADP-リボシル化の新しい牤の発见-about 200 kinds of compounds, ADP-リボシルトランスフェラ-ゼ(ニワトリ liver stasis core および Seven-faced bird red blood cell から refined) とポリ (ADP-リボ-ス) シンテタ-ゼに対する blocking effect を, in The in vitro reaction system is investigated with the help of いて. As a result, the structure of the known obstacle is completely different and the existence of many powerful obstacles is obvious.その中には, トリプトファンのnatural metabolites, various ビタミンおよびビタミン様substances and Inducer (レチナ-ル, k_2, k_3, α-リポ acid, unsaturated fatty acid Naど)がまれていた.また、これらの Effect がそれぞれのzyme にSpecific なものと公なものに分かれることを见出だした. 3. Membrane intrinsic ADP-リボシル化zymeとアクセプタ-のanalytic-ラット脳より単leave the membrane to draw pointsが[^<32>P]または[^<1 4>C] NADからADP-リボ-ス partially をconcentration, time dependence and acid insolubility are determined, and the その measurement system is established.アクセプタ-となるアミノAcid は, hindering the stability of 剤やからアルギニンと presumed された.

项目成果

Banasik,M.: "Inhibition of poly(ADP-ribose)synthetase by unsaturated fatty acids,vitamins and vitamin-like substances" FEBS Lett.(1990)

Banasik,M.：“不饱和脂肪酸、维生素和维生素类物质对聚（ADP-核糖）合成酶的抑制”FEBS Lett.（1990）

Ueda,K.: "Poly(ADP-ribose),its molecular biology and medicine" Kor.J.Biochem.21. (1989)

Ueda,K.：“聚（ADP-核糖），其分子生物学和医学”Kor.J.Biochem.21。

Saito,I.: "Cloning of cDNA encoding bovine thymus poly(ADP-ribose)sythetase:Evolutionally conserved segments and their potential functions" Gene. (1990)

Saito,I.：“克隆编码牛胸腺聚（ADP-核糖）合成酶的 cDNA：进化保守片段及其潜在功能”基因。

Banasik,M.: "ADP-Ribose Transfer Reactions:Mechanisms and Biological Significance(M.K.Jacobson and E.L.Jacobson,eds.)" Springer-Verlag, 527 (1989)

Banasik，M.：“ADP-核糖转移反应：机制和生物学意义（M.K.Jacobson 和 E.L.Jacobson，编辑）”Springer-Verlag，527（1989）

Concha,I.I: "Intracellular distribution of poly(ADP-ribose)synthetase in rat spermatogenic cells" Exp.Cell Res.180. 353-366 (1989)

Concha，I.I：“大鼠生精细胞中聚（ADP-核糖）合成酶的细胞内分布”Exp.Cell Res.180。