グルタミルリボース-5-リン酸蓄積症とADP-リボシル化蛋白質の代謝

5-磷酸谷氨酰核糖贮积病和 ADP 核糖基化蛋白质代谢

• 批准号: 61219011
• 负责人: 上田 国寛
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Special Project Research
• 财政年份: 1986
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1986 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-61219011/
• 关键词: グルタミルリボース-5-リン酸蓄積症; ADP-リボシル化蛋白質; 先天性代謝異常症; ポリADP-リボース; ADP-リボシル蛋白質リアーゼ; 5′-ADP-3″デオキシペントース-2″-ウロース

二年前発見された新しい先天性代謝異常症「グルタミルリボース-5-リン酸蓄積症」の発症機序を明らかにするために、本症患の患者から分離された線維芽細胞について、最も関連の深いと思われるADP-リボシル化蛋白質の代謝系諸酵素活性を解析した。比較のために患者の両親、および対照として同年令の正常人の細胞を用い、いずれも細胞を超音波破砕して得たホモジェネートを測定対象とした。まず、合成系の酵素、ポリADP-リボースシンテターゼ(〔【^(14)C】〕NADから酸不溶性分画に取り込まれる【^(14)C】で測定)、および分解系の二つの酵素、ポリADP-リボースグリコヒドロラーゼ(〔【^(14)C】〕ポリADP-リボースからの酸不溶性【^(14)C】の消失で測定)とホスホジエステラーゼ(p-ニトロフェニル-TMPからのp-ニトロフェノールの生成-【A_(590)】の増加-で測定)の三活性は、患者,両親,対照(三例)の間で有意な差が認められなかった。もう一つの分解系酵素、ADP-リボシル蛋白質リアーゼ、の活性も、〔【^(14)C】〕ADP-リボシルヒストンH2Bからの酸不溶性【^(14)C】の消失で測定する限り、患者、両親、対照の間で有意差が認められなかったが、反応生成物の解析から、用いた条件下では上記基質がリアーゼよりもホスホジエステラーゼによって優先的に分解されることが判明した。そこで、ホスホジエステラーゼ活性の大部分を5mMAMPで阻害した条件下で反応を行なわせ、その生成物をダウェクス-1のカラムにかけて、リアーゼの特異的反応生物である5′-ADP-3″-デオキシペントース-2″-ウロースを分離定量した結果、対照に比して、患者の細胞の本酵素活性が有意に低いことを示唆する予備的実験成績を得た。今後、さらに詳しく条件を検討した上、この成績を確認するとともに、ADP-リボシル蛋白質リアーゼの異常な活性低下の遺伝的背景を追究する予定である。

Two years ago, a new congenital metabolic disorder called "5-hydroxy-acid accumulation disorder" was discovered. The mechanism of the disease was clarified. The patients with the disease were separated from the vascular cells. The enzyme activities of the most related ADP-5-hydroxy-acid metabolism protein were analyzed. Compare the results of ultrasound with those of normal subjects. Enzyme of synthesis system, enzyme of decomposition system, enzyme of synthesis system, enzyme of decomposition system ADP-Dissolution ([^(14)C]] ADP-Dissolution ([^(14)C]) Acid Insolubility ([^(14)C])(p-TMP)-[A_(590)]-[A_(590)-[A_(590)]-[A_(590)-[A_(590)]-[A_(590)]-[A_(590)-[A_(590)]-[A_(59 Determination of the disappearance of enzymes, ADP-rich proteins, active enzymes,[^(14)C] ADP-rich proteins, H2B, acid insoluble [^(14)C], patient, parent, and control subjects Under these conditions, we can determine whether there is any difference between the two. Most of the enzyme activity of the cells was inhibited by 5mMAMP, and the products were isolated and quantified by 5′-ADP-3″-ADP-2 ″-ADP. The enzyme activity of the cells of the patients was intentionally low. In the future, we will discuss the above conditions and confirm the background of abnormal activity of ADP-free protein.

项目成果

K.Hatakeyama: Journal of Biological Chemistry. 261. 114902-1491 (1986)

K.Hatakeyama：生物化学杂志。

上田国寛: 日本臨床代謝学会記録. 23. 268-269 (1986)

Kunihiro Ueda：日本临床代谢学会记录 23. 268-269 (1986)。