膜内在性ADP-リボシル転移酵素による刺激伝達の調節に関する研究

膜内ADP-核糖基转移酶调节刺激传递的研究

• 批准号: 63641512
• 负责人: 上田 国寛
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1988
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1988 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-63641512/
• 关键词: ADP-リボシル転移酵素; ADP-リボシル化アクセプター; 膜画分; NAD; ポリ(ADP-リボース)合成酵素; GTP結合蛋白質; ADP-リボシル転移酵素阻害剤; ニコチンアミド; アデニルシクラーゼ

細胞膜に内在するADP-リボシル転移酵素と同アクセプターの確認-ラット脳より単離した膜画分と[^<32>P]NADを反応させることにより、膜結合性ADP-リボシル転移酵素と、この酵素によってADP-リボシル化を受けるアクセプター蛋白質の存在を確認した。この際、細胞内で圧倒的に活性の強いポリ(ADP-リボース)合成酵素によるADP-リボシル化と区別する必要があったが、SDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動後のオートラジオグラフィのバンドの位置(42kDaと39kDa)、ポリ(ADP-リボース)合成酵素阻害剤(3-アミノベンズアミド、カルサラム)の効果およびADP-リボシル-蛋白質結合の安定性(中性ヒドロキシラミン中で半減期約1時間)により明瞭にして区別できることを示した。アクセプターとしては、SDSゲル上の見掛けの分子量より、いわゆるGTP結合蛋白質群のGiα、Goαの可能性が強く示唆された。2.各種ADP-リボシル転移酵素の阻害剤の発見-約100種類の有機化合物について、ポリ(ADP-リボース)合成酵素(コウシ胸腺から精製)とモノマー特異的ADP-リボシル転移酵素(七面鳥赤血球およびニワトリ肝臓核より精製)に対する阻害対策を、in vitro反応系を用いて検討した。その結果、従来知られたニコチンアミドやベンズアミドの誘導体の他に、キノリン、クマリン、カルサラム、フタルヒドラジド、ベンゾキノンなど各種構造の化合物多数が、それぞれの酵素に特異的な(あるいは共通な)強い阻害効果をもつことを見出した。3.今後の研究計画-当初の方針通り、ADP-リボシル転移酵素とアクセプターを膜から可溶化し、精製して、酵素学的諸性質を明らかにするとともに、アデニルシクラーゼ系と組み合わせて、刺激伝達の調節機序を解明することが重要で、上記成果によりその基礎が確立された。

Membrane に inner す る ADP - リ ボ シ ル と planning shift enzyme with ア ク セ プ タ ー の confirmation - ラ ッ ト 脳 よ り 単 from し た membrane draw points と [^ < > 32 P] NAD を anti 応 さ せ る こ と に よ り, membrane associativity ADP - リ ボ シ ル planning shift enzyme と, こ の enzyme に よ っ て ADP - リ ボ シ ル change を by け る ア ク セ プ タ ー protein の exist Youdaoplaceholder0 confirm that た. こ の interstate, intracellular で 圧 pour に activity strong の い ポ リ (ADP - リ ボ ー ス) synthetic enzyme に よ る ADP - リ ボ シ ル と distinguish す る necessary が あ っ た が, SDS - ポ リ ア ク リ ル ア ミ ド ゲ ル electric 気 swimming after の オ ー ト ラ ジ オ グ ラ フ ィ の バ ン ド の location (42 kda と 39 kda), ポ リ (ADP - リ ボ ー ス) synthetic enzyme inhibitor against tonic (3 - ア ミ ノ ベ ン ズ ア ミ ド, カ ル サ ラ ム) の unseen fruit お よ び ADP - リ ボ シ ル - protein の stability (neutral ヒ ド ロ キ シ ラ ミ ン で in half life about 1 time) に よ り clear に し て difference で き る こ と を shown し た. ア ク セ プ タ ー と し て は, SDS ゲ ル の see hanging on け の molecular weight よ り, い わ ゆ る GTP binding protein group made の Gi alpha, strong possibility Go alpha の が く in stopping さ れ た. 2. All kinds of ADP - リ ボ シ ル planning shift enzyme の resistance against tonic の 発 see - roughly 100 kinds の organic compounds に つ い て, ポ リ (ADP - リ ボ ー ス) synthetase (コ ウ シ thymus か ら refined) と モ ノ マ ー specific ADP - リ ボ シ ル planning shift enzyme (seven red blood cell surface bird お よ び ニ ワ ト リ routine liver nuclear よ り refined) に す seaborne る resistance against policy を polices, in vitro the reverse 応 is を using て検 て検 to claim た. そ の results, 従 to know ら れ た ニ コ チ ン ア ミ ド や ベ ン ズ ア ミ ド の induced の he に, キ ノ リ ン, ク マ リ ン, カ ル サ ラ ム, フ タ ル ヒ ド ラ ジ ド, ベ ン ゾ キ ノ ン な ど various tectonic most が の compounds, そ れ ぞ れ に specific な の enzyme (あ る い は な) common い strong resistance against unseen fruit を も つ こ と を shows し た. 3. の research projects in the future - when の policy り, ADP - リ ボ シ ル planning shift enzyme と ア ク セ プ タ ー を membrane か ら し melting, refining し て, enzyme to learn the nature of the を Ming ら か に す る と と も に, ア デ ニ ル シ ク ラ ー ゼ department と group み close わ せ て sequence, stimulate 伝 の conditioner を interpret す る こ と が important で, written に よ り そ の basis Youdaoplaceholder0 establishes された.

项目成果

Hatakeyama,Kazuyuki: "ADP-ribose Transfer Reactions:Mechanisms and Biological Significance" Springer-Verlag, 47-52 (1989)

Hatakeyama，Kazuyuki：“ADP-核糖转移反应：机制和生物学意义”Springer-Verlag，47-52（1989）

Concha,Ilona I.: Exp.Cell Res. 180. 353-366 (1989)

Concha，Ilona I.：实验细胞研究。

Uchida,Kazuhiko: Jap.J.Cancer Res.(Gann). 79. 1094-1100 (1988)

内田和彦：日本癌症研究（江恩）。

Banasik,Marek: "ADP-ribose Transfer Reactions:Mechanisms and Biological Significance" Springer-Verlag, 130-133 (1989)

Banasik，Marek：“ADP-核糖转移反应：机制和生物学意义”Springer-Verlag，130-133（1989）