籠入りATP光分解後の筋細胞内ATP加水分解経過を蛍光pH指示薬で高速に記録する

使用荧光 pH 指示剂高速记录笼内 ATP 光解后肌内 ATP 水解进度

• 批准号: 02239212
• 负责人: 堀内 桂輔
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: 大分医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02239212/
• 关键词: BCECF; かごめATP; 光分解; 化学力学エネルギ-変換; ATPase; 筋収縮; プロトン

BCECFによるミリ秒のH^+蛍光測光が可能であれば、かごめATP光分解法と組み合せて、筋収縮蛋白のATP加水分解によるH^+遊離とエネルギ-変換との関連の解明に役立つと考えて、これを試みた。光分解には、キセノン閃光ランプ(200J、1ms、300〜350nm)を用いた。モルモット腸腰筋から得たスキンドファイバ標本を毛細石英管に詰めた。管内を灌流しながら筋の張力を測れるように工夫した。石英管は、光電子増倍管を備えた倒立落射蛍光顕微鏡の対物レンズの上に固定して蛍光測光に備えた。灌流液には10〜20mM BCECFと1〜4mMかごめATP、10〜20mM Pipesを加えた。光分解時に閃光の一部が光電子増倍管に迷入し、長く巨大なア-チファクトが蛍光信号に混入した。H^+変化のないはずの実験トレ-スを以て、変化のあるはずのトレ-スを補正することをこころみた。補正が不完全であり、またS/N比が小さかったので、最も興味のある光分解直後のH^+変化が全く不明だったが、定常収縮に伴う緩やかなH^+遊離であろうと思われる蛍光信号変化がかろうじて観察できた。現在における問題と対策。(1)光分解の近紫外線光源としてのキセノンランプ閃光が比較的長くかつ少しの赤色光を混じえており、これが蛍光測光に混入する問題は深刻である。極めて短かく単色であるルビ-レ-ザ-の倍波を光分解光源に用いることも検討する必要がある。(2)閃光混入の問題は、閃光時に光電子増倍管の感度を一過性に低下させることのできるゲ-ト回路の付いた測光装置を利用することで解決できる可能性もある。(3)蛍光強度を高めて相対的に閃光の影響を小さくすることも検討する必要がある。蛍光装置の二色鏡を、BCECFの特性に合わせて特別に設計することがそれである。

It is possible to use BCECF photolysis, ATP photolysis, protein hydrolysis plus water decomposition, H^ + isolation, photolysis, and so on. Photolysis (200J, 1ms, 300~350nm) makes use of photolysis. The waistband is in the middle of the waist, the quartz tube is in the air. In the tube, the pressure is measured and the time is measured. Quartz tube, photoelectron double tube equipment, handstand falling light micrometer equipment, fixed optical equipment, light measuring equipment. The perfusate was perfused with 1-4 mm 10~20mM BCECF, ATP and 10~20mM Pipes. When the light is decomposed, a photoelectron multiplier tube is obsessed with it, and the optical signal is mixed with the light signal. H^ + make sure that you don't know what you're going to do. The correction is not complete, the signal is smaller, the most sensitive is that the light is decomposed, the whole is not known, the constant is not known, and the light signal is changed. We are now working out a policy on the issue of peace and order. (1) the photolysis of the near-ultraviolet light source is much lower than that of the red light, and the light measurement is mixed with the light source. The light source of octave photolysis is used to analyze the necessary light source. (2) when the light is mixed with the problem, the sensitivity of the photoelectron multiplication tube is low, and the loop optical measuring device makes use of the optical device to solve the problem. (3) the light intensity is high and the light intensity is very high. The dichroism and BCECF characteristics of the lighting device are in line with the special design equipment.

项目成果

堀内 桂輔ほか: "かごめATP光分解に伴う筋細胞内ATPaseをBCECF蛍光信号で高速記録する試み" 日本生理学雑誌. 53. (1991)

Keisuke Horiuchi 等人：“尝试使用 BCECF 荧光信号快速记录与 Kagome ATP 光解相关的肌内 ATP 酶”，《日本生理学杂志》53（1991）。