生体受容体を機能材料として開発するための基礎的研究

开发生物受体作为功能材料的基础研究

• 批准号: 03205097
• 负责人: 蝦名 洋介
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03205097/
• 关键词: インスリンレセプタ-; 機能材料; 遺伝子工学

レセプタ-タンパクを高純度大量精製するために、それを機能を保ったまま、細胞外培養液中に放出させることを試みた。インスリンレセプタ-のβサブユニットには23個の疎水性アミノ酸が連続する膜通過部位が存在し、そこが細胞膜の肪質分画と親和性を持ち、細胞膜に因定されているものと考えられる。そしてその23個の疎水性アミノ酸の後には、3個の親水性のアミノ酸が続いており、もうそれ以上膜内に入り込まないようになっていると考えられる。疎水性アミノ酸23個からなる膜通過部位の直後の3個の親水性アミノ酸を人工的に取り除いたレセプタ-をcDNA上で作成し、発現させた。この人工変異レセプタ-はプロセシングも正常に行なわれ、細胞膜上に出現し、インスリンとも正常に結合、インスリンシグナルも正常に細胞内に伝達されていることがわかった。しかし培養液中にはこのレセプタ-は放出されなかった。このことから多くのレセプタ-の膜通過部位直下に見られる親水性アミノ酸クラスタ-の機能については単なる膜レセプタ-のストップシグナルではないことが判明し、今後の解析が必要である。次に膜通過部位23個の疎水性アミノ酸のうち中ほどにある5つのアミノ酸LeuーIleーPheーValーPheを除いた人工変異レセプタ-を作製しても、培養液中には放出されず、膜上に存在して、レセプタ-機能を持っていることがわかった。現在膜通過部位のいくつかの人工変異レセプタ-を作製し、その機能を検討中である。またレセプタ-のαサブユニット全体とβサブユニットの一部をcDNA上で作り発現させるとαサブユニットは培養液中に放出されることがわかった。このαサブユニットにはインスリンが結合するためこれをインスリンの微量定量法に使用できるか検討を進めている。またこのαサブユニットを用いてインスリンとレセプタ-の結合様式の解析も可能となる。

レ セ プ タ - タ ン パ ク を high purity large refining す る た め に, そ れ を function を bartender っ た ま ま, extracellular medium, に release さ せ る こ と を try み た. イ ン ス リ ン レ セ プ タ - の beta サ ブ ユ ニ ッ ト に は 23 の 疎 water-based ア ミ ノ acid が even 続 す る membrane through parts が し, そ こ が membrane の fat mass points draw と affinity に を hold ち, cell membrane was determined さ れ て い る も の と exam え ら れ る. 23 の そ し て そ の 疎 water-based ア ミ ノ acid after の に は, three の hydrophilic の ア ミ ノ acid が 続 い て お り, も う そ れ に within the membrane into the above り 込 ま な い よ う に な っ て い る と exam え ら れ る. 疎 water-based ア ミ ノ acid 23 か ら な る membrane passes a の parts の three の hydrophilic ア ミ ノ acid を artificial に take り except い た レ セ プ タ - を cDNA で し consummate, 発 now さ せ た. こ の artificial - different レ セ プ タ - は プ ロ セ シ ン グ も normal line に な わ れ, に し on cell membrane, イ ン ス リ ン と も normal に combination, イ ン ス リ ン シ グ ナ ル も に normal cells に 伝 da さ れ て い る こ と が わ か っ た. In the <s:1> った culture medium of the culture, に に った レセプタ レセプタ レセプタ- レセプタ release されな った った. こ の こ と か ら more く の レ セ プ タ - の membrane through the site by に see ら れ る hydrophilic ア ミ ノ acid ク ラ ス タ - の function に つ い て は 単 な る membrane レ セ プ タ - の ス ト ッ プ シ グ ナ ル で は な い こ と が.at し, future の analytic が necessary で あ る. Through parts of 23 times に membrane の 疎 water-based ア ミ ノ acid の う ち in ほ ど に あ る 5 つ の ア ミ ノ acid Leu ー Ile ー Phe ー Val ー Phe を except い た artificial - different レ セ プ タ - を cropping し て も, medium, に は release さ れ ず, membrane に exist on し て, レ セ プ タ - function を hold っ て い る こ と が わ か っ た. At present, the membrane passes through the site of <s:1> く く そ <s:1> <s:1> artificial modification レセプタ-を to make <s:1> and そ <s:1> functions を検 to meet である. ま た レ セ プ タ - の alpha サ ブ ユ ニ ッ ト all と beta サ ブ ユ ニ ッ ト の a を cDNA で be り 発 now さ せ る と alpha サ ブ ユ ニ ッ ト は medium, に release さ れ る こ と が わ か っ た. こ の alpha サ ブ ユ ニ ッ ト に は イ ン ス リ ン が combining す る た め こ れ を イ ン ス リ ン の に trace quantitative method using で き る か beg を 検 into め て い る. The また て <s:1> αサブユニットを can be となる by using the また て て <e:1> スリ スリ とレセプタ とレセプタ- <e:1> combined with the pattern <e:1>.

项目成果

Hayashi,H.,Ebina,Y.et al.: "Phosphprylation in vitro of the 85 kDa subunit of phosphatidylinositol 3ーkinase and its possible activation by insulin recepter tyrosine kinase." Biochem.J.280. 769-775 (1991)

Hayashi, H., Ebina, Y. 等人：“磷脂酰肌醇 3-激酶 85 kDa 亚基的体外磷酸化及其可能被胰岛素受体酪氨酸激酶激活。”Biochem.J.280 (1991)。

Murakami,Y.,Ebina,Y.et al.: "Inentification of Two Enhancer Elements in the Gene Encoding the Type 1 Glucose Transporter from the Mouse Which are Responsive to Serum,Growth Factor and Oncogenes." J.Biol.Chem.

Murakami,Y.,Ebina,Y.等人：“对小鼠 1 型葡萄糖转运蛋白编码基因中两个增强元件的鉴定，这些元件对血清、生长因子和癌基因有反应。”

E.Araki,E.,Ebina,Y.et al.: "A cluster of four Sp1 binding sites required for efficient expression of the human insulin receptor gene." J.Biol.Chem.266. 3944-3948 (1991)

E.Araki,E.,Ebina,Y.等人：“人类胰岛素受体基因有效表达所需的四个 Sp1 结合位点簇。”