プロテアーゼのプロセシングと菌体外分泌における前駆体プロ領域の役割

前体原区在蛋白酶加工和细胞外分泌中的作用

• 批准号: 06248203
• 负责人: 松沢 洋
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06248203/
• 关键词: アクアライシンI; 耐熱性プロテアーゼ; セリンプロテアーゼ; ズブチリシン型プロテアーゼ; 前駆体プロ領域; C末端プロ領域; 菌体外分泌; プロセシング

アクアライシンIは好熱菌Thermus aquaticusが菌体外に分泌するズブチリシン型プロテアーゼで、その前駆体は、N末端シグナル配列、N末端プロ領域、プロテアーゼ領域、C末端プロ領域からなる。大腸菌の遺伝子発現系では、前駆体が外膜に蓄積し、高温(65℃)処理により成熟酵素が生成する。そして、N末端プロ領域は酵素の生成に必須であり、C末端プロ領域は前駆体の細胞質膜通過に必須で、それぞれ前駆体のホールディングとアンホールディングという相反する活性を持つ、分子内シャペロンとして機能すると推定される。本研究においては、C末端プロ領域の機能をさらに明確にすることを目的とした。1.好熱菌Thermus thermophilusの遺伝子発現系では、成熟酵素が菌体外に分泌されるが、C末端プロ領域に欠失がある変異型の場合には、その遺伝子をもつプラスミドの形質転換体は得られないことから(大腸菌においては得られるにもかかわらず)、C末端プロ領域はプロテアーゼの菌体外分泌に必須であることが示された。しかし、好熱菌の発現系において、C末端プロ領域が前駆体の細胞質膜の通過に関与しているのか、あるいは外膜の通過に関与しているのかは不明である。2.C末端プロ領域が細胞膜(細胞質膜あるいは外膜)結合活性をもつのか否かを明らかにするため、マルトース結合蛋白質-C末端プロ領域の融合蛋白質の大腸菌での大量発現系を作製した。精製融合蛋白質の細胞膜結合活性を検討したが、マルトース結合蛋白質そのものが膜結合活性をもっているため、C末端プロ領域の役割を明らかにすることは出来なかった。現在、融合蛋白質から切り離したC末端プロ領域を精製中であり、この抗体を作製し実験を進める予定である。

The bacteria Thermus aquaticus secreted in vitro were isolated from the bacteria, including the precursors, the progenitors, the N-terminal antigens, the N-terminal domains, the C-terminal domains and the C-terminal domains. The mature enzymes were produced at high temperature (65 ℃) and high temperature (65 ℃). The production of enzymes in the N-terminal and N-terminal domains must be confirmed, the cell membrane of the progenitor in the C-terminal domain must be activated, and the membrane of the progenitor in the C-terminal domain must be activated, and the molecular weight of the enzyme must be determined through the cell membrane. The purpose of this study is to ensure that the purpose of this study is very clear. 1. Good Thermus thermophilus bacteria, mature enzymes secreted by bacteria in vitro, C-terminal enzymes were secreted in vitro, and the C-terminal domain was not expressed in the body. In the C-terminal domain, the exocrine secretion of bacteria must be detected. The cell membrane of the progenitor cell in the field of the C-terminal, the cell membrane of the cell, the outer membrane of the cell, the cell membrane, the outer membrane, the outer membrane. 2. The C-terminal domain cell membrane (cell membrane membrane and outer membrane) combined with the activity of the cell membrane, the C-terminal domain fusion protein, the fusion protein, the fusion protein. The membrane binding activity of the fusion protein, the membrane of the fusion protein and the membrane of the fusion protein. At present, the fusion protein is used to determine the level of antibody in the field of C-terminal antigens.