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大腸菌ペニシリン結合蛋白質3のN末端細胞質膜貫通領域の機能解析

大肠杆菌青霉素结合蛋白3 N端胞质跨膜区的功能分析

基本信息

批准号：
06247203
负责人：
松沢洋
金额：
$ 1.34万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

大腸菌のペニシリン結合蛋白質(PBP)2と3は細胞複製に必須で、それぞれ細胞の伸長(変異株は球状細胞となる)と細胞分裂の際の隔壁形成に関わるペプチドグリカン合成酵素である。いずれも、一次構造上N末端側から、細胞質膜貫通領域、トランスグリコシラーゼ領域、トランスペプチダーゼ領域の順に位置している。N末端膜貫通領域は切断されないシグナル配列として機能し、酵素領域部分をペリプラズム側に露出するようにして細胞質膜に結合させる、錨(アンカー)の役目をしている。本研究においては、PBP2とPBP3のN末端細胞質膜貫通領域の機能と特異性を、融合蛋白質を作製し解析した。1.PBP2とPBP3の間で、N末端膜貫通領域を置き換えた融合蛋白質は、いずれもPBP2、PBP3の変異株を相補する活性を失っていた。このことは、N末端膜貫通領域はそれぞれの特異的機能を発揮する上で重要であることを示している。2.N末端領域は親水性アミノ酸配列と疎水性アミノ酸配列とからなる。PBP3の場合、N末端から膜結合領域直前までの親水性領域を欠失しても遺伝的相補活性を保持したことから、N末端領域における特異性は膜結合領域に限定された。しかし、PBP2の場合には、親水性領域を欠失すると遺伝的相補活性を失ったことから、この部分が重要であることが分かった。3.現在、N末端領域の親水性アミノ酸配列と疎水性アミノ酸配列をキメラとしてもつ融合蛋白質(酵素領域はPBP2またはPBP3)の発現プラスミドを作製中であり、その遺伝的相補活性を解析するところである。

E. coli protein binding protein (PBP)2 and 3 are essential for cell division, cell elongation (allogeneic globular cells) and partition formation during cell division. In the middle, the N-terminal side of the primary structure, the plasma membrane penetration area, the transition area, and the transition area are located in the middle. The N-terminal membrane penetration domain is divided into two parts: the functional domain and the enzyme domain. In this study, we analyzed the functional specificity and fusion protein of PBP2 and PBP3 in the N-terminal plasma membrane penetration domain. 1. PBP2 and PBP3 are complementary to each other in the N-terminal membrane domain. The N-terminal membrane penetration domain is important for the development of specific functions. 2. The N-terminal domain is hydrophilic and hydrophobic. In the case of PBP3, the N-terminal membrane-binding domain is not lost, and the complementary activity of the N-terminal domain is maintained. The specific membrane-binding domain is limited. In the case of PBP2, the hydrophilic domain is missing, and the complementary activity is missing. 3. Now, the N-terminal domain of hydrophilic acid alignment and hydrophobic acid alignment is different, and the fusion protein (enzyme domain PBP2 and PBP3) is developed in the process of production, and the complementary activity of the protein is analyzed.