機能性核酸分子のX線解析による基本構造の解明

通过X射线分析阐明功能性核酸分子的基本结构

• 批准号: 06258205
• 负责人: 竹中 章郎
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06258205/
• 关键词: リボザイム; RNA; X線解析

RNAの特異な構造が種々の機能に関与しているらしいことが明らかにされつつあるが,その機能発現のメカニズムを理解するには立体構造およびミクロな構造の知見が不可欠であり,またそれによって機能の改変や新しい機能を有する分子の設計も可能となる.我々は機能発現の基本となる部分の構造を明らかにするためにX線解析を進めている.ハンマーヘッド型リボザイムはその基質鎖を含めて2次構造が仮定されている。構造を明らかにする立場から、(1)一定の立体構造を維持するために基質鎖を常に必要とするのか,(2)基質鎖なしでも活性部分が一定の構造体を形成いているのか,という問題を解決する必要がある。本年度は結晶化と並行して行った構造組成の実験から,基質結合前後での挙動を明らかにした.2種類のハンマーヘッド型リボザイムについて,それぞれを構成する3本のRNA鎖を種々の組み合わせで混合して,ポリアクリルアミドゲルによる電気泳動の実験を行った.これらの結果から、どちらのリボザイムも,(1)基質がなくても複合体を形成すること,(2)基質鎖を加えると3者の複合体を形成すること,(3)基質鎖同士がダイマーを形成している場合でも加熱処理すると3者複合体を形成すること,が明らかになった。したがって,ハンマーヘッド型リボザイムは,タンパク質酵素と同じように,活性部分が一定の構造をもっていて,基質が来ると結合し分解反応を起こすという概念が成立することが解った。これらの知見に基づき,ハンマーヘッド型リボザイムの酵素部分とこれに基質鎖を加えた3者複合体の結晶化実験を行った結果,両方のケースについて結晶を得ることができた.特に前者についてはX線回折実験に適した単結晶が得られたので,現在X線解析を進めている.

The specific structure and function of RNA are related to the function and function of RNA.カニズムをUnderstand the するにはthree-dimensional structure およびミクロなstructure のknowledge がnot owe であり, またそれによってfunctional のchange There is a new function and a molecular design is possible. I have a basic function and a partial structure.めにX-ray analysis を enter めている. ハンマーヘッド type リボザイムはそのstromal lock をcontaining めて 2 times structure が定されている. Structureを明らかにする Positionから, (1) Certain three-dimensional structureをMaintenanceするためにMatrix lockを Constantにnecessaryとするのか, (2) The active part of the matrix lock is certain and the structure is formed, so the problem is solved and it is necessary. This year's crystallization process is parallel to the structural composition of the structure, before the matrix is combined.后での挙动を明らかにした.2 types of のハンマーヘッド type リボザイムについて,それぞれを constitutes する3本のRNA lockをkind々の集团み合わせでmixedして,ポリアクリルアミドゲルによる电気 Swimmingの実験を行った.これらのRESULTから、どちらのリボザイムも, (1) matrix がなくThe ても complex is formed by the すること, (2) the matrix lock を plus the えると3 person complexすること, (3) The case where the matrix lock is made of がダイマーをThe composite of the three components is formed by heat treatment, including the composite components.したがって, ハンマーヘッド type リボザイムは, タンパクzyme と Same as じように, the active part is certain Structure をもっていて, matrix が come る と combination し decomposition reaction を rise こ す と い う concept が established す る こ と が solution っ た.これらの知见に记づき, ハンマーヘッド type リボザイムのzyme part とこれに matrix lock を plus え た 3 person complex の crystallization 実験 を row っ た results, 両方のケースについて Crystallization をget ることができた.Special にformer についてはX-ray return The crystallization of the original color is correct, and the X-ray analysis is now done.