タンパク質を配位子とする希土類錯体の構造

以蛋白质为配体的稀土配合物的结构

• 批准号: 07230224
• 负责人: 竹中 章郎
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07230224/
• 关键词: X線解析; コンカナバリンA; 3-イソプロピルリンゴ酸脱水素酵素; 希土類錯体; ガドリニウム

希土類元素は金属酵素や核酸酵素の活性増大,抗HIV活性など生体分子と特異的に相互作用する可能性が見いだされてる.また蛋白質結晶学の位相問題を解く新規プローブとして注目を浴びている.これらの機能を理解し新しい希土類化合物をデザインするためにはその構造的知見が不可欠である.本研究では希土類原子が生体分子とどのように相互作用するのか、立体構造と機能にどのような影響を及ぼすのか、を明らかにすることを目的とした.タチナタマメから単離されたコンカナヴァリンAを、テトラマ-状態(pH6.5)で結晶化を行った。得られた単結晶をGdCl_3溶液に浸積することによって、金属原子を置換した.高エネルギー物理学研究所の放射光を用いて、この結晶のX線回折データを測定した結果,新しい結晶形であることを発見した.また回折斑点に広がりが生じGa^<3+>イオンの結合による変化を示した.分子置換法で構造を決定し,原子パラメータの精密化を行った.各サブユニットの活性部位にはもともとCaとMnが存在するが,結晶学的に独立な2つのサブユニットの一方だけに,CaとMnの間にGdと思われる部位が見つかり,構造を大きく変化させていることが分かった.またタンパク質表面にもGdの結合サイトが見つかった.原子パラメータの精密化を現在進めている.3-イソプロピルリンゴ酸脱水素酵素はロイシン合成に関与する蛋白質であり、活性発現にはMgイオンを必須とする。希土類原子の構造に及ぼす影響を調べるために、中等度好熱菌Bacillus coagulans由来の本酵素をアポ状態で結晶化を行った。条件のわずかな違いにより、3種類の結晶形が存在すること、そのうちの一つのX線解析に適していることを見いだした。高度好熱菌由来の酵素の構造を借りて分子置換法で構造決定することができた。

Greek-turkish class element は の や nucleic acid enzyme activity raised large metal enzyme, anti-hiv activity な ど raw body molecular interaction と specific に す る が likely see い だ さ れ て る. ま た protein crystallography の phase problem を solution く new rules プ ロ ー ブ と し て attention を bath び て い る. こ れ ら の function を understand し new し い greek-turkish compounds を デ ザ イ ン す る た め に は The knowledge of そ そ construction が cannot be lacking in である. This study で は soil type atomic が became the body molecular と ど の よ う に interaction す る の か, three-dimensional structure と function に ど の よ う な influence を and ぼ す の か, を Ming ら か に す る こ と を purpose と し た. タ チ ナ タ マ メ か ら 単 from さ れ た コ ン カ ナ ヴ ァ リ ン A を, テ ト ラ マ - state (pH6.5) で crystallization を line っ た. The られた単 crystallization をGdCl_3 solution に deposition する た とによって and metal atom を displacement た are obtained. Institute of physics of high エ ネ ル ギ ー の radiation light を using い て, こ の crystallization の X-ray inflexion デ ー タ を determination し た as a result, the new し い crystalline form で あ る こ と を 発 see し た. ま た inflexion spots に hiroo が り が raw じ Ga ^ < 3 + > イ オ ン の combining に よ る variations change を shown し た. Molecular displacement method で を decided し structure, atomic パ ラ メ ー タ の line motors を っ た. Each サ ブ ユ ニ ッ ト の active site に は も と も と Ca と Mn が exist す る が, crystallography に independent な 2 つ の サ ブ ユ ニ ッ ト の side だ け に, Ca と に Gd between Mn の と think わ れ る parts が see つ か り, large tectonic を き く variations change さ せ て い る こ Youdaoplaceholder0 is divided into とが った. Youdaoplaceholder2 パ パ the surface of the <s:1> mass に に Gd <s:1> is combined with サ サ トが トが as shown in the った った った った. Atomic パ ラ メ ー タ の motors を now into め て い る. 3 - イ ソ プ ロ ピ ル リ ン ゴ acid dehydration vegetable enzyme は ロ イ シ ン synthetic に masato and す る protein で あ り, active 発 now に は Mg イ オ ン を must と す る. The atom <s:1> structure に and ぼす influence を to regulate べるために, moderate thermophilic bacteria Bacillus coagulans to obtain the をアポ state で crystallization を process った of this enzyme. Conditions の わ ず か な violations い に よ り, 3 types の crystalline form が す る こ と, そ の う ち の a つ の X-ray analytical に optimum し て い る こ と を see い だ し た. The <s:1> structure of the enzyme from highly thermophilic bacteria is を, and the で structure is determined by the て molecular displacement method で. The する <s:1> とがで た た た た た た た

项目成果

D. Tsuchiya, A. Takenaka, et al.: "Cryst allization and Preliminary X-ray Analysis of 3-Isopropylmalate Dehydrogenase from the Moclerate Facultative Thernophile, Bacillus coagulans" Acta Crystallogr.D52(in press). (1996)

D. Tsuchiya、A. Takenaka 等人：“来自 Moclerate 兼性嗜热菌凝结芽孢杆菌的 3-异丙基苹果酸脱氢酶的结晶和初步 X 射线分析”Acta Crystallogr.D52（出版中）。

D. Tsuchiya, A. Takenaka, et al.: "Two Strategies for thermos pabilization of protein structures: Crystal Structuce of 3-Isopropylmalate dehgelrogenase from maclerate facultative therimophile, Bacillus coagulans" EMBO J.(発表予定). (1996)

D. Tsuchiya、A. Takenaka 等人：“蛋白质结构热稳定性的两种策略：来自 Macclerate 兼性嗜热芽孢杆菌凝结芽孢杆菌的 3-异丙基苹果酸脱氢酶的晶体结构”EMBO J.（待提交）。