グループII・イントロンの機能構造の研究

II族内含子功能结构研究

• 批准号: 06258210
• 负责人: 白石 英秋
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06258210/
• 关键词: グループIIイントロン; スプライシング; 分子生物学

発芽酵母のミトコンドリアのoxi3遺伝子内のイントロンは、これまでに発見されているグループIIイントロンの中で最も自己触媒活性が高いので、これを用いて研究をおこなった。グループIIイントロンは、2次構造上、ドメインIからドメインVIまでの6つのステムループ構造を持っている。グループIIイントロンのスプライシングの第1段階においては、ドメインVI内のアデノシン2′-OH基が5′スプライス部位を求核攻撃して投げ縄状の構造を形成する経路と、水酸イオンが攻撃して加水分解する、投げ縄状構造を経由しない反応経路の2種類が存在する。最近、5′エクソンとドメインIだけから成るmRNA前駆体に、別途合成したドメインVを加えると、効率は低いが5′スプライス部位での加水分解が起こることが報告された。この事実はドメインIとドメインVだけがあれば、これらが5′スプライス部位と相互作用してスプライシングの第1段階を起こしうることを示している。そこで、5′加水分解反応を詳細に解析するために、単純な系の開発をおこなった。具体的には、まず、T7プロモーター、5′エクソン、およびドメインIの下流に、さらにドメインVをつないだプラスミドを作成し、その転写物の5′スプライス部位での加水分解活性を、さまざまな条件で検討した。その結果、構築したプラスミドの転写物は、0.5M以上のMg2+イオンと1.5M以上のKC1の存在下で、5′スプライス部位での自己切断反応を起こすことがわかった。最適の条件下では、30分の反応により、もとのRNAの約10%が自己触媒的に切断された。構築したプラスミドではドメインVをコードるす領域の両端に制限酵素切断部位を入れてあるので、この領域をまざまな突然変異を持つドメインV様配列と置換することができる。これを利用して、現在、加水分解反応におけるドメインVの必須領域の解明を試みている。

発 bud yeastのミトコンドリアのoxi3缝子内のイントロンは、これまでに発见されているグループII イントロンの中でも's own catalytic activity is high and いので, and これを uses いて research をおこなった.グループII イントロンは, secondary structure, ドメインIからドメインVIまでの6つのステムループstructuralをholdingっている.グループII イントロンのスプライシングの 1st stage においては、ドメインVI内のアデノシン2′-OH groupが5′スプライス PARTをCalculation Attack the structure of the structure and form the structure of the attack, and the water acid and water attack the structure plus There are 2 types of water decomposition and water-breaking structures. Recently, 5′ エクソンとドメインIだけから成るmRNA pre-mRNA bodyに, other way synthetic したドメインVをadds えると, efficiency は low いが 5′ スプライス parts でのadds water to decompose がrise こることが report された.この事実はドメインIとドメインVだけがあれば、これらが5′スプライス部Bit と interaction してスプライシングの 1st stage をrise こしうることをshow している.そこで、5′Add water decomposition reaction をDetailed analysisするために、単pure systemの开発をおこなった. Specifically, には, まず, T7プロモーター, 5′エクソン, およびドメインIの流に, さらにドメインVをつないだプラスミドを成し, その転物の5′スプライス PART でのhydrolytic activity を, さまざまなconditions で検 Discussion した.そのRESULTS, CONSTRUCTION したプラスミドの転物は, 0.5M and above のMg2+イオンと1.5M and above The upper part of KC1 has the lower part, and the 5′ スプライス part is cut off by itself and the reaction is raised. Under the optimal conditions, では, 30 minutes of のにより, and もとのRNAの are about 10% of their own catalyst and cut off the された. Constructing the したプラスミドではドメインVをコードるす domain の両Endにlimited enzyme cutting site を入れてあるので, この区をまざまな suddenly changed をhold つドメインV様alignment and replacement することができる. The use of これをして, now, add water to decompose the reaction におけるドメインVの解明をtrial みている.