グループII・イントロンの機能構造の研究

II族内含子功能结构研究

• 批准号: 06258210
• 负责人: 白石 英秋
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06258210/
• 关键词: グループIIイントロン; スプライシング; 分子生物学

発芽酵母のミトコンドリアのoxi3遺伝子内のイントロンは、これまでに発見されているグループIIイントロンの中で最も自己触媒活性が高いので、これを用いて研究をおこなった。グループIIイントロンは、2次構造上、ドメインIからドメインVIまでの6つのステムループ構造を持っている。グループIIイントロンのスプライシングの第1段階においては、ドメインVI内のアデノシン2′-OH基が5′スプライス部位を求核攻撃して投げ縄状の構造を形成する経路と、水酸イオンが攻撃して加水分解する、投げ縄状構造を経由しない反応経路の2種類が存在する。最近、5′エクソンとドメインIだけから成るmRNA前駆体に、別途合成したドメインVを加えると、効率は低いが5′スプライス部位での加水分解が起こることが報告された。この事実はドメインIとドメインVだけがあれば、これらが5′スプライス部位と相互作用してスプライシングの第1段階を起こしうることを示している。そこで、5′加水分解反応を詳細に解析するために、単純な系の開発をおこなった。具体的には、まず、T7プロモーター、5′エクソン、およびドメインIの下流に、さらにドメインVをつないだプラスミドを作成し、その転写物の5′スプライス部位での加水分解活性を、さまざまな条件で検討した。その結果、構築したプラスミドの転写物は、0.5M以上のMg2+イオンと1.5M以上のKC1の存在下で、5′スプライス部位での自己切断反応を起こすことがわかった。最適の条件下では、30分の反応により、もとのRNAの約10%が自己触媒的に切断された。構築したプラスミドではドメインVをコードるす領域の両端に制限酵素切断部位を入れてあるので、この領域をまざまな突然変異を持つドメインV様配列と置換することができる。これを利用して、現在、加水分解反応におけるドメインVの必須領域の解明を試みている。

The most active catalyst in the yeast was found to be the most active one in the yeast. The structure of the first and second time of construction is maintained. In the first stage of the structure, the 2′-OH group in the structure VI is attacked by nuclear attack, and the structure of the structure is formed by hydrolysis. Recently, the 5′-position mRNA precursor was synthesized in different ways, and the 5′-position mRNA precursor was synthesized in different ways. The first stage of the first stage of the second stage of the third stage of the fourth stage of the fourth stage of the fourth The development of the 5′ hydrolysis reaction system was analyzed in detail. The specific conditions for the preparation of the hydrolysis activity at the 5 ′ position of each compound were discussed. As a result, the structure of the structure of the composition is more than 0.5M Mg2 +, more than 1.5M KC1 in the presence of, 5′-position position of the self-cutting reverse start. Under the optimum conditions, about 30 minutes of reverse transcription and about 10% of RNA were cut off from the catalyst. The structure of the domain is different from that of the domain. The domain is different from that of the domain. This is the first time that we've had a chance to solve this problem.