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グループII・イントロンの機能構造の研究

II族内含子功能结构研究

基本信息

批准号：
07250212
负责人：
白石英秋
金额：
$ 0.83万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07250212/
关键词：
グループIIイントロン RNA リボザイム

项目摘要

グループIIイントロンは、切り出されたイントロンが投げ縄状構造をとることやイントロン内にU2/U6RNAと類似の構造を持つことから、進化上、高等真核生物のスプライシングに関与するスプライソゾームの原型であると考えられている。グループIIイントロンは、二次構造上、ドメインIからドメインVIまでの6つのドメインを持っているが、これらのうちで特に保存性が高いのは、ドメインI、ドメインVおよびドメインVIである。種々の欠失実験の結果から、グループIIイントロン内の6つのドメインのうち、ドメインIとドメインVが、このイントロンの基本的な触媒活性を担っているものと考えられている。そこで、このイントロンの触媒作用を詳細に解析するための単純な系を確立するために、5'エキソンとドメインIを含む断片の下流にドメインVをつないだプラスミドを作成した。その際、ドメインVをコードする領域の両端に制限酵素切断部位を入れて、ドメインVの部分を任意の合成DNAと置換できるようにデザインした。このプラスミドから転写されたRNAは、ドメインIとドメインVしか持たないにもかかわらず、高濃度のMg^<2+>とK^+の存在下では、反応率は低いものの、5'スプライス部位での切断反応が起こることを確認した。この系ではドメインVをコードする領域の両端に制限酵素切断部位を入れて、ドメインVの部分を任意の合成DNAと置換できるようにデザインしてある。それを利用してドメインVの領域をランダムなヌクレオチド(4種類のヌクレオチドの混合物)に置換し、5'スプライス部位での切断反応の活性を持つ分子種を選択的に分離することによって、活性に必須なドメインV内の部位を同定することを試みた。

The Gelaprop II intron has a pitch-like structure and U2/U6RNA and similar structures within the intron. Evolutionarily, the evolution of advanced eukaryotes is related to the prototype of the Splash-like system. In addition, the storage property of the special materials is high, and the storage property of the special materials is high. The results of seed loss are as follows: 1. The basic catalytic activity of the six components in the catalyst is affected by the change of catalyst activity. The catalytic action of the catalyst is analyzed in detail, and the pure system is established. In addition, the DNA of the terminal restriction enzyme of the domain is replaced by the DNA of the terminal restriction enzyme. In the presence of Mg^<2+> and K^+ at high concentrations, the reaction rate was low, and the reaction rate was confirmed to be low at the 5'site. This system is composed of two parts of DNA, one part of DNA and the other part of DNA. For the purpose of utilizing the domain of the molecule V, the site of substitution, the site of cleavage, the site of activity, the site of molecular species selection, the site of isolation, the site of activity, the site of identification, the site of activity, the site of identification, the site of identification.