NMRによるコフィリン・デストリンの立体構造解析と機関相関

NMR 法对 cofilin 和 destrin 进行三维结构分析及机构相关性

• 批准号: 06261241
• 负责人: 畠中 秀樹
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06261241/
• 关键词: コフィリン; デストリン; アクチン結合タンパク質; 多次元NMR; 構造機能相関; 構造生物学

我々は、ストレス応答に重要な役割を果たすと考えられているコフィリン・デストリンの立体構造決定と機能相関の解明を目指して実験を行ってきた。の目的のために必要な多次元NMRの測定法・解析法は完成した。特に後者については,新規ピークピッカーや強力な多次元ベースライン補正プログラム,さらにInteractiveな解析マクロプログラムを作り終え,加えて以前に作成した2次元NMR解析プログラムシステムを拡張することにより,多次元NOESYスペクトル解析システムの構築を完了した。一方、ターゲットであるデストリンについては、まず安定同位体ラベル体を大量に作製し,ラベル体の多次元NMR測定(HNCA,HN(CO)CA,CBCA(CO)NH,CBCANH,NH(CA)HA,HBHA(CO)NH,HCCH-TOCSY,C(CO)NH)を行い,アミノ酸主鎖および側鎖の大部分の帰属を完了し,α炭素の化学シフトを用いて2次構造の推定を行った。さらに,3次構造決定のためのNOESY測定(N-edit NOESY-HSQC,C-edit NOESY-HSQC)を行い、先述の解析システムにより立体構造計算を進めた。その結果、我々はRMSD(Root-Mean-Square Deviation)で1.0Å程度の立体構造を得ることができた。観測されないシグナルがあるせいか、まだ全てのNOE由来の距離情報の間の整合性を確認するには至っていないが、全体のフォールディングや2次構造ユニット間の位置関係は正しいと考えられる。この結果はコフィリンファミリーに属するタンパク質間の相互のアラインメントの結果や、既に知られている生化学的な知見を良く説明するもので、今後このファミリーの構造機能相関を議論するために非常に有用であると考えられる。

The three dimensional structure determines the function of the three dimensional structure. For this purpose, it is necessary to complete the determination of multiple element NMR. In particular, the new rules include the following: 1. The new rules include the new rules; 2. The new rules include the new rules; 3. The new rules include the new rules; 4. The new rules include the new rules; 5. The new rules include the new rules; 6. The new rules include the new rules; 7. The new rules include the new rules; 8. The new rules include the new rules; 9. The new rules include the new rules; 10. A large number of stable isotope clusters were prepared, and the multiple NMR measurements of the clusters (HNCA,HN(CO)CA,CBCA(CO)NH,CBCANH,NH(CA)HA,HBHA(CO)NH,HCCH-TOCSY,C(CO)NH) were carried out. Most of the components of the acid main chain and side chain were completed, and the secondary structure of α carbon chemical chain was estimated. In addition, NOESY determination (N-edit NOESY-HSQC,C-edit NOESY-HSQC) of the three structural determination methods is carried out, and the analysis methods described above are carried out. RMSD(Root-Mean-Square Deviation) 1.0 The distance information of the origin of the NOE is confirmed by the position relationship between the two structures. The results of this study are very useful for understanding the relationship between structure and function in the future.