コフィリン及びデストリンの動物培養細胞に於ける発現・機能制御システムの構築

培养动物细胞中丝切蛋白和结蛋白表达及功能控制系统的构建

• 批准号: 06780602
• 负责人: 森山 賢治
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06780602/
• 关键词: コフィリン; デストリン; アクチン結合タンパク質; アクチン; ストレス; 熱ショック; アンチセンス; IRES

培養マウス線維芽細胞C3H-2Kを材料として、アクチン結合タンパク質コフィリン並びにデストリンの発現を抑制できるアンチセンスRNA発現プラスミドの選択を以下のように行なった。発現プラスミドとして、本細胞で効率よく働くSRαプロモーターの下流に、インフルエンザへマグルチニン由来のHA1エピトープを付加したネオマイシン耐性遺伝子(HA1-APH)と数種の逆向きコフィリン(或いはデストリン)cDNA断片を順に配置したプラスミド、または逆に配置したプラスミドを作製した。単に逆に配置しただけではHA1-APHの発現が見込まれないため、この場合にはHA1-APHの直前にウイルス(ECMV)由来のIRES配列(5'-キャプ構造に依存せず、mRNA上の任意の位置からタンパク質の翻訳を可能にする配列)を挿入した。細胞に一過性に発現させてから熱ショックで核内アクチン・ロッド(コフィリンとデストリンが結合している)を誘導した後、蛍光抗体染色法によりアンチセンスRNAを発現している(即ち、HA1-APHを発現している)細胞をHA1を認識する抗体で識別し、それらの細胞に於けるコフィリン(或いはデストリン)の存在量と核内蓄積効率をコフィリンやアクチンに対する抗体で調べた。その結果、逆向きcDNA断片をHA1-APHの下流に配置した方がより有効であり、特にデストリンのコード領域cDNAを組み込んだものでは、熱ショック・ストレスを負荷した際のデストリンの核内蓄積が25〜32%にまで低下した。コフィリンの場合も、5'側26例bp或いは660bpのcDNA断片を組み込んだものでコフィリンの核内蓄積が27〜43%まで低下した。有効性が期待されるこれらのcDNA断片を使用して安定形質転換体を取得し、ストレス耐性獲得等に果たす両タンパク質の役割を検討する段階に入っている。

In order to improve the performance of C3H-2K materials, the following information is selected in this paper. In this way, the following information is selected in this paper. In this paper, we can see that there are several kinds of reverse endurance sensors (HA1-APH), such as SR α, local cell rate, cDNA α, low temperature, low temperature, The reverse configuration does not allow you to do so. The inverse configuration, the HA1-APH configuration, and the HA1-APH configuration, the ECMV configuration, the IRES configuration, the mRNA configuration, the location, the location, As soon as the cell was activated, it was found that there was no change in the level of DNA in the nucleus. after the guidance, the light antibody staining method was used to detect the antibody level of RNA (that is, HA1-APH). The identification of antibodies against HA1 was detected. There is an increase in the number of positive cells in the nucleus. There is an accumulation of positive cells in the nucleus. The results show that the reverse cDNA fragments, HA1-APH fragments, and configuration devices are important in the field of cDNA. The results show that there are significant differences in the results, the results and the results. There were 26 cases of bp, 26 cases of bp or 5 'cases of 660bp. CDNA fragments were used to determine whether there was a positive reaction in the nucleus (27%). There is an expectation that the cDNA fragments can be obtained by using the stable shape, the body, the patience, and so on.