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NMRによるコフィリン、デストリンの立体構造解析と機能相関

核磁共振法分析cofilin和destrin的三维结构及功能关系

基本信息

批准号：
05268242
负责人：
稲垣冬彦
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05268242/
关键词：
コフィリンデストリン NMR 立体構造スペクトル解析システム

项目摘要

コフィリン、デストリンはアクチン結合タンパク質であり、アクチン繊維に結合し、その脱重合を誘起することが知られている。本研究はNMR法を用いてこれらのタンパク質の高次構造を決定し、機能を立体構造に基づいて明らかにすることを目的としている。本年度は多次元NMRの測定、解析システムを構築し、多次元NMRの解析法を確立することを目的とした。大腸菌によるデストリンの大量発現系を用い、安定同位体ラベルを行った。この場合には最少培地での生育に適したBL21をホストとして用いた。^<13>Cグルコース、^<15>NH_4Clを炭素原、窒素原として用い、1lあたり5mgの収率であった。ダブルラベルタンパク質を用いプロトン検知多核NMRの測定を行った。測定にはバリアンUNITY500、500MHzNMRを用い、主鎖の帰属に必要な三重共鳴NMRの実験として、HNCA、HN(CO)CA、HN(CA)HA、HCA(CO)N、HCACO、HNCO、HNCACBを行なった。また側鎖の帰属を行なうためHCCHTOCSYの測定を行なった。これらの多次元スペクトルを有機的に結び付ける解析システムを検討し、デストリンに適用した。このシステムは主鎖の連鎖帰属を行なうことを目的としたものであり、50%程度の主鎖の帰属を完了している。今後主鎖、側鎖の全帰属を行なうと共に、4次元NOEの測定を行ないデストリンの立体構造を決定する予定である。

The combination of the two elements is known to be the combination of the two elements. In this study, NMR method was used to determine the high-order structure and function of the three-dimensional structure. This year, the determination and analysis of multiple NMR were established. A large number of production systems for E. coli are used to stabilize isotope production. In this case, the minimum training ground is suitable for birth. BL21 is suitable for use.^ <13>C, <15>NH_4Cl, carbon, phosphorus, phosphorus, The determination of multi-nuclear NMR was carried out in the middle of the study. The determination of the unicity of 500, 500 MHz NMR is necessary for the determination of triplet resonance NMR, HNCA, HN(CO)CA, HN (CA)HA, HCA(CO)N, HCACO, HNCO and HNCACB. HCCHTOCSY is a very important tool for the determination of the quality of products. This is the first time that a person's name has been used. The main lock chain belongs to the line, 50% of the main lock belongs to the line In the future, the determination of the total number of elements of the main lock and the side lock shall be determined by the determination of the three-dimensional structure.