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オーキシン作用機構の分子生物学的解析

生长素作用机制的分子生物学分析

基本信息

批准号：
06269202
负责人：
高橋陽介
金额：
$ 1.92万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06269202/
关键词：
オーキシン転写制御形質転換植物 GTP結合タンパク質

项目摘要

本研究では植物ホルモンとして最も多面的な作用を持つオーキシンで発現が制御される遺伝子群をクローン化しその機能並びに発現制御機構を調べることを目的としている。これまでにparA,parB,parCをタバコ葉肉細胞プロトプラストから、arcAをタバコ培養細胞BY-2からクローン化して解析してきた。本年度は以下のような成果があった。(1)オーキシンに関するシス配列の解析parBのオーキシンに関するシス領域をGUSをレポーターとする形質転換タバコの実験系で解析した。その結果5′上流域-210〜-162までの49bpと-374〜-279までの96bpの二つの領域が生理的濃度のオーキシンに独立に応答して遺伝子を活性化できることが示された。これらの配列はas-1等と異なるものであった。またparBのオーキシンに対する応答性は発生の進行と共に大きく変化することが明らかになった。オーキシンに関するシス配列は複数種類存在し、それらの活性は組織や発生段階によって大きな影響を受けると考えられる。(2)arcA産物の機能解析WD-40 repeatと呼ばれる分子内繰り返し構造を有するarcA産物は、様々な生体制御因子を構成員とするGβファミリーに属する。arcAはこのファミリーのなかでも活性化されたCキナーゼと結合するラットのRACK1等と共にサブファミリーを形成している。植物細胞内でarcA産物と結合するタンパク質にも興味が持たれる。arcA産物の生化学的解析には抗arcA抗体が必須である。そこでヒスチジンのヘキサマーを付加したarcA産物を大腸菌内で過剰発現させアフィニテイー精製し、これを抗原としてマウスおよびラットを免疫しarcAの産物に対するポリクローナル抗体の作製に成功した。この抗体を用いてarcA産物の細胞内局在の検討、免疫沈降法によりarcA産物と結合するタンパク質の探索等を行う予定である。

This study explores the most multi-faceted effects of the plant ホルモンとして and the control system it holds The function of the remaining sub-groups is the combination of the function and the control mechanism. The purpose is to adjust the control mechanism.これまでにparA,parB,parCをタバコMesophyll Cellsから、arcAをタバコcultivated cells BY-2からクローン化してanalyticsしてきた. The following achievements this year are as follows. (1)オーキシンに关するシス配arrayのanalyticsparBのオーキシンに关するThe field of シスをGUSをレポーターとするmorphosis転changeタバコの実験Systemでanalyticした.そのRESULTS 5′ Upper Basin -210~-162までの49bpと-374~-279までの96bpの二つの区がphysiological concentration のオーキシンにINDEPENDENT に応respond して伝子をACTIVATION できることが Show された. The これらのmatching sequence はas-1 and other となるものであった.またparBのオーキシンに対する応Answer sex は発生の progress と公に大きく変化することが明らかになった. There are multiple types of オーキシンに关するシス arrangement and there are many types of それらのActivity and organization and the stage of development is affected by the けると卡えられる. (2) Functional analysis of arcA product WD-40 repeat intramolecular structure of arcA product, member of the biological control factor とするGβファミリーに genus. arcAはこのファミリーのなかでもactivationされたCキナーゼと knot合するるラットのRACK1 and other common にサブファミリーをformed している. The product of arcA in plant cells is combined with the same quality and taste. Anti-arcA antibodies are also necessary for biochemical analysis of arcA products.そこでヒスチジンのヘキサマーを加したarcA product でpassed in coliform bacteria させアフィニテイーrefined し, これをantigen としてマウスおよびラットをimmune しarcA のproduct に対するポリクローナルantibody に was successfully produced した. It is predetermined to examine the intracellular localization of the arcA product using the antibody and explore the binding quality of the arcA product and the immunoprecipitation method.