マングローブ植物耐塩性機構の解析とマングローブ林維持・回復に関する基礎研究

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1.Burguiera sexangulaの展開直後の葉を用いてRNAの抽出とcDNAライブラリーの作製を試みた。また、RNA抽出実験と独立に、塩耐性に関与するイオン輸送分子として、細胞膜のH^+ポンプに注目した。すでに知られているH^+ポンプ遺伝子構造から、保存性の高い配列(ATP結合部位とリン酸化部位)を選び出し、プライマーの設計を行った。結果:設計したプライマーを用いて、イネおよびエンドウのcDNAからH^+ポンプ遺伝子を見いだすことに成功した。一方、実験材料であるマングローブ植物では、実験上の困難が多く、各種の方法で、マングローブ新葉組織からの全RNA抽出に挑戦しているが、有為な結果を得られていない。2.Burguiera sexangula、Burguiera gymnorrhiza,Rhizophora apiculataそれぞれの葉組織及び胎生種子を滅菌した後、小片に切り分けて培養した。培地としてムラシゲ・スク-グ培地及びアミノ酸培地を用いた。植物ホルモンとして、2,4-Dと4PUを用いた。結果:主に葉組織を用い、かなり強い滅菌法を用いたが、培養開始後約2〜3週間で、生き残った葉切片の切り口からカルス様の細胞塊の出現が見いだされた。また、繁殖子切片からも同様のカルス様細胞塊が成長を始めた。培養条件の検討から、アミノ酸培地が優れていること、ホルモン濃度としては約2μM程度が良いこと、さらに培養温度として30℃の場合にカルス様細胞塊の形成が25℃より早いことが明らかになった。3.細胞膜でのイオン輸送活性を電気生理学的に測定するための前段階として、葉組織からの単一細胞の酵素的単離を試みた。結果:葉組織を短冊状に切り、Cellulase Onozuka RS(1.0%) Driselase(1.0%) Macerozyme R10(0.5%)で処理したところ、4時間から12時間の振とうで葉肉細胞とプロトプラストの単離が観察された。