糖鎖と細胞骨格の相互作用の機構解明に関する研究

今回、我々は微小管の主要構成成分であるチューブリンと糖脂質の相互作用を解析する事を目的として様々な検討を行い、チューブリン分子上にシアル酸結合糖鎖が存在することを見い出した。実験にはブタ脳より精製したαおよびβチューブリンを用い、糖鎖の検出のためにシアル酸に対するモノクローナル抗体(SG3-1)を使用した。チューブリンをV8プロテアーゼやキモトリプシンで部分分解後、SDS-PAGEを行いこれらのモノクローナル抗体と反応するペプチド断片および反応のないペプチド断片それぞれのN末アミノ酸配列を解析し、マッピングを行った。その結果、α、βチューブリン両方からSG3-1抗体に反応するペプチド断片を得た。αチューブリンからは、SG3-1抗体に反応するフラグメントとして、N末端から始まる6Kd、及び20Kdのフラグメント、さらに(N末端から数えて)28残基目から始まる16kd、及び170残基目から始まる31kdのフラグメントが得られた。βチューブリンでは、N末端から始まる18Kd、及び25Kdのフラグメント、さらに199残基目から始まる28kdのフラグメントが、SG3-1抗体に反応するフラグメントとして得られた。現在これらの同定されたペプチド断片に関してさらに詳細な糖鎖結合部位の同定を行っているところである。

今回、我々は微小管の主要構成成分であるチューブリンと糖脂質の相互作用を解析する事を目的として様々な検討を行い、チューブリン分子上にシアル酸結合糖鎖が存在することを見い出した。実験にはブタ脳より精製したαおよびβチューブリンを用い、糖鎖の検出のためにシアル酸に対するモノクローナル抗体(SG3-1)を使用した。チューブリンをV8プロテアーゼやキモトリプシンで部分分解後、SDS-PAGEを行いこれらのモノクローナル抗体と反応するペプチド断片および反応のないペプチド断片それぞれのN末アミノ酸配列を解析し、マッピングを行った。その結果、α、βチューブリン両方からSG3-1抗体に反応するペプチド断片を得た。αチューブリンからは、SG3-1抗体に反応するフラグメントとして、N末端から始まる6Kd、及び20Kdのフラグメント、さらに(N末端から数えて)28残基目から始まる16kd、及び170残基目から始まる31kdのフラグメントが得られた。βチューブリンでは、N末端から始まる18Kd、及び25Kdのフラグメント、さらに199残基目から始まる28kdのフラグメントが、SG3-1抗体に反応するフラグメントとして得られた。現在これらの同定されたペプチド断片に関してさらに詳細な糖鎖結合部位の同定を行っているところである。