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ガングリオシドと細胞骨格タンパク質の相互作用の機構解明に関する研究

阐明神经节苷脂与细胞骨架蛋白相互作用机制的研究

基本信息

批准号：
05274104
负责人：
細谷浩史
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05274104/
关键词：
細胞骨格ガングリオシド GM2 微小管 Tay-Sachs細胞

项目摘要

(1)培養Tay-Sachs細胞およびGM2に対するモノクローナル抗体を使用し、間接蛍光抗体法によってGM2の細胞内局在を検討した。観察には、通常の蛍光顕微鏡及びレーザースキャン顕微鏡の両方を併用した。その結果、細胞内に多数のベシクル状の染色像が観察され、また、その周辺に繊維状の染色像が常に観察された。細胞の固定法には、(1)フォルマリン水溶液、(2)パラフォルムアルデヒド、(3)グルタールアルデヒド、(4)メタノールなどを用いたが、(1)および(4)を用いた固定の場合のみ、上記のベシクル状及び繊維状の構造の両方が明瞭に観察された((4)による固定は、微小管の構造保持に最も適していることが分かっている)。(2)次に、(1)で観察された繊維状の染色像が、細胞骨格構造かどうかを、GM2とチューブリンに対するモノクローナル抗体を用いた二重染色法により検討した。その結果、これらの繊維状構造は両抗体により二重染色されることが明らかになった。(3)(2)で観察された繊維状構造が微小管かどうかをさらに明確にするために、ノコダゾール(微小管を破壊し、数を少なくする)およびビンブラスチン(微小管の"結晶構造"を細胞内に作る)をTay-Sachs細胞に作用させ、(2)と同様に二重染色法により観察を行った。その結果、これらの操作により改変された微小管構造は、全てGM2抗体により染色され、細胞内で微小管とGM2が共局在していることが明らかにされた。(4)次に、タクソールを用いてTay-Sachs細胞から微小管を直接単離し、GM2が結合しているかどうかを検討した。その結果、ELISA法およびウェスタンブロッティング法により、単離・精製された微小管からGM2が検出された。また精製されたチューブリンダイマーにタクソールを加えて再構成した微小管に、外からGM2を加えたところ、GM2は微小管と結合することが明らかになった。

(1)The use of antibodies against Tay-Sachs cells and GM2 in culture, and the use of indirect light antibodies to detect GM2 in cells The common use of optical micromirrors and optical micromirrors The results showed that most of the staining patterns in the cells were observed, and the staining patterns in the cells were often observed. Cell immobilization methods include: (1) aqueous solution of cellulose;(2) aqueous solution of cellulose;(3) aqueous solution of cellulose;(4) aqueous solution of cellulose;(1) aqueous solution of cellulose;(4) aqueous solution of cellulose;(5) aqueous solution of cellulose;(6) aqueous solution of cellulose;(7) aqueous solution of cellulose;(8) aqueous solution of cellulose;(9) aqueous solution of cellulose;(10) aqueous solution of cellulose;(11) aqueous solution of cellulose;(12) aqueous solution of cellulose;(13) aqueous solution of cellulose;(14) aqueous solution of cellulose;(15) aqueous solution of cellulose;(16) aqueous solution of cellulose;(17) aqueous solution of cellulose;(18) aqueous solution of cellulose;(19) aqueous solution;(10) aqueous solution The structure of the microtube remains optimal. (2)The second,(1), was to examine the dimensional staining images, cytoskeletal structure, and GM2, and to examine the antibodies by the double staining method. As a result, these three-dimensional structures were double stained with antibodies. (3)(2) Observation of microtube-like structures in Tay-Sachs cells;(2) Observation of microtube-like structures in Tay-Sachs cells;(3) Observation of microtube-like structures in Tay-Sachs cells;(4) Observation of microtube-like structures in Tay-Sachs cells;(5) Observation of microtube-like structures in Tay-Sachs cells;(6) Observation of microtube-like structures in Tay-Sachs cells;(7) Observation of microtube-like structures in Tay-Sachs cells;(8) Observation of microtube-like structures in Tay-Sachs cells;(9) Observation of microtube-like structures in Tay-Sachs cells; and (9) Observation of microtube-like structures in Tay-Sachs cells. The results showed that the microtubule structure was changed, the GM2 antibody was changed, and the microtubule and GM2 in the cell were changed. (4)Next, the Tay-Sachs cell was separated from the microtube directly, and the GM2 cell was combined with the microtube directly. The results of ELISA method are as follows: Refine the microtube, add the GM2, and combine the GM2 with the microtube.