細胞質分裂期におけるリン酸化ミオシンIIの役割解明に関する研究

磷酸化肌球蛋白II在胞质分裂过程中的作用研究

• 批准号: 10213206
• 负责人: 細谷 浩史
• 金额: $ 33.09万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (B)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10213206/
• 关键词: ミオシン調節軽鎖; ミオシン重鎖; 細胞骨格; アクチン; ミオシンII; リン酸化; ストレスファイバー; 収縮環; ミオシン軽鎖; 細胞分裂; 細胞質分裂; ZIPキナーゼ; MRLC; ミオシン2重リン酸化; ミオシンリン酸化; MLCK; Zipキナーゼ; ミオシン軽鎖キナーゼ; MLCIC; ミオシン; HeLu 細胞

細胞分裂期におけるミオシンリン酸化の役割解明を目的として、ヒーラ細胞を実験材料に使用して以下の成果を得た。1.19Serがリン酸化されたミオシン調節軽鎖を特異的に認識するモノクローナル抗体を作製した。2.18Thrおよび19Serの2ケ所が2重リン酸化されたミオシン調節軽鎖を特異的に認識するモノクローナル抗体を作成した。3.これらの抗体を用いて、間期および分裂期のヒーラ細胞を染色したところ、間期の細胞ではストレスファイバーが染色され、分裂期の細胞では収縮環の領域が染色されることが明らかになった。4.2重リン酸化ミオシンに対する抗体およびミオシン重鎖の抗体を用いて分裂期の細胞を2重染色したところ、収縮環領域では、前者はdisc状に染色像が観察されたが、後者の染色像はリング状であることが明らかになった。これらの結果から、収縮環でミオシン重鎖と軽鎖が必ずしも共局在しないという事実が明らかにされた。5.ミオシン調節軽鎖のリン酸化部位に関する変異体を作成しヒーラ細胞への導入を行ったところ、18Thrおよび19Serにアスパラギン酸を導入した疑似2重リン酸化ミオシン調節軽鎖を導入した細胞では、細胞分裂の阻害は特に観察されないが、これらの変異ミオシン調節軽鎖は収縮環領域に局在することが明らかにされた。19Serにアスパラギン酸を導入した疑似1重リン酸化ミオシン調節軽鎖の場合でも同様の結果が観察されたが、収縮環への局在は前者ほど顕著ではなかった。また野生型ミオシン調節軽鎖を導入した場合では、収縮環への局在は顕著に観察されなかった。

Cell division period に お け る ミ オ シ ン リ ン acidification cut の service interpret を purpose と し て, ヒ ー を ラ cells be 験 に materials use し て の results under を た. 1.19 Ser が リ ン acidification さ れ た ミ オ シ ン adjust 軽 lock を specific に know す る モ ノ ク ロ ー ナ ル antibody を cropping し た. 2.18 Thr お よ び 19 ser の 2 ケ が 2 heavy リ ン acidification さ れ た ミ オ シ ン adjust 軽 lock を specific に know す る モ ノ ク ロ ー ナ ル antibody を made し た. 3. こ れ ら を の antibody with い て, interphase お よ び divide の ヒ ー ラ cells を dyeing し た と こ ろ, interphase の cells で は ス ト レ ス フ ァ イ バ ー が dyeing さ れ, divide の cells で は 収 shrinkage ring の field が dyeing さ れ る こ と が Ming ら か に な っ た. 4.2 heavy リ ン acidification ミ オ シ ン に す seaborne る antibody お よ び ミ オ シ ン heavy lock を の antibodies to use い て divide の cells を 2 heavy staining し た と こ ろ, 収 shrink ring で は, the former は disc shaped like が に dyeing 観 examine さ れ た が, the latter の dyeing like は リ ン グ shape で あ る こ と が Ming ら か に な っ た. こ れ ら の results か ら, 収 shrinkage ring で ミ オ シ ン heavy lock と 軽 が will lock ず し も total bureau in し な い と い う things be が Ming ら か に さ れ た. 5. ミ オ シ ン adjust 軽 lock の リ ン acidification parts に masato す る - variant を made し ヒ ー ラ cells へ の import line を っ た と こ ろ, 18 THR お よ び 19 ser に ア ス パ ラ ギ ン acid を import し た suspected 2 heavy リ ン acidification ミ オ シ ン adjust 軽 lock を import し た cells で は, cell division の resistance against は に 観 examine さ れ な い が, こ れ ら の variations The domain of the 軽 シ シ 軽 regulating 軽 locking <e:1> contracting ring is に in the する ら とが and ら ら にされた. 19 ser に ア ス パ ラ ギ ン acid を import し た suspected 1 heavy リ ン acidification ミ オ シ ン adjust 軽 lock の occasions で も with others の results が 観 examine さ れ た が, 収 shrinkage ring へ の bureau in は former ほ ど 顕 the で は な か っ た. ま た wild-type ミ オ シ ン adjust 軽 lock を import し た occasions で は, 収 shrinkage ring へ の bureau in は 顕 the に 観 examine さ れ な か っ た.

项目成果

B.I.Gerashchenko: "Growth kinetics of algal populations exsymbiotic from Paramecium bursaria by flow cytometry measurements"Cytometry. 44(3). 257-263 (2001)

B.I.Gerashchenko：“通过流式细胞术测量草履虫共生藻类种群的生长动力学”细胞计数。

M.Murata-Hori: "ZIP kinase identified as a novel myosin regulatory light chain kinase in HeLa cells"FEBS Lett.. 451(1). 81-84 (1999)

M.Murata-Hori：“ZIP 激酶被鉴定为 HeLa 细胞中的新型肌球蛋白调节轻链激酶”FEBS Lett.. 451(1)。

M.Murata-Hori: "ZIP kinase identified as a novel myosin regulatory light chain kinase in HeLa cells." FEBS lett. in press. (1999)

M.Murata-Hori：“ZIP 激酶被鉴定为 HeLa 细胞中的一种新型肌球蛋白调节轻链激酶。”

M.Hino: "Small heat shock protein 27(HSP27) associates with tubulin/microtubules in HeLa cells"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 271(1). 146-169 (2000)

M.Hino：“小热休克蛋白 27 (HSP27) 与 HeLa 细胞中的微管蛋白/微管相关”Biochem.Biophys.Res.Commun. 271(1)。

B.Gerashchen Ko: "Enrichment for late telophase cell populations using flow cytometry."Cytometry. 41. 148-149 (2000)

B.Gerashchen Ko：“使用流式细胞术富集晚期末期细胞群。”细胞术。