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ルービン根による酸性フォスファターゼ分泌能の遺伝子解析とリン欠乏耐性植物の育成

鲁宾根分泌酸性磷酸酶能力的遗传分析及耐缺磷植物的发育

基本信息

批准号：
08255202
负责人：
但野利秋
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

前年度の実験において、5.5×10^4pfuのcDNAライブラリーからcDNAの全長を含んでいると予想されるおよそ2,200bpの断片を含む陽性クローンを単離し、LASAP1と命名した。本年度は、このクローンのdeletion seriesを作成し、Sangerのdideoxy chain-terminal法により全塩基配列を決定した。LASAP1は2,187bpからなり、、637アミノ酸残基をコードする1,914bpのopen reading flameを有していた。データベースPDB,SWISS-PROT,PIR,GenPeptに対してアミノ酸配列の相同性検索を行った結果、Phaseolus vulgaris由来のacid phosphatase (APase)に76%、Arabidopsis thaliana由来のAPaseに71%、2つのAspergillus由来のAPaseにそれぞれ59%、58%の高い相同性を有していた。Phaseolus vulgaris由来のAPaseについてはFe,Znを含有する活性中心を7つのアミノ酸が構成することが報告されている(Strater et al., 1995)が、全てのアミノ酸がlupin,Arabidopsisで保存されており、これらの酸素は全て同様の機構で反応することが示唆された。先に、本酵素のN-末端アミノ酸配列を決定したが、LASAP1にはこれより上流に31のアミノ酸からなる領域が存在した。この領域は疎水性の高い領域であり、分泌性であるダイズおよびArabidopsisのAPaseのそれと類似していることを考えると、この領域は分泌に必要なシグナル配列であると考えられる。また、前年度に調製可能となったプローブLAP493を用いゲノムライブラリーをスクリーニングしたところ、1つの陽性クローンが得られた。現在このクローンについて解析中である。

In the previous year's experiment, 5.5× 10^4 pfu of cDNA contained the full length of the cDNA, which was expected to contain only 2,200 bp fragments, and LASAP1 was named. This year, the deletion series was created, and the diepoxy chain-terminal method of Sanger was used to determine the overall base arrangement. LASAP1 has 2,187bp open reading flame residues and 1,914bp open reading flame residues. The results showed that 76% of Phaseolus vulgaris derived acid phosphatase (APase), 71% of Arabidopsis thaliana derived APase, 59% of Aspergillus derived APase, and 58% of Aspergillus derived APase were highly identical. Phaseolus vulgaris origin APase contains Fe,Zn active center 7 and acid composition (Strater et al., 1995), the whole acid is lupin,Arabidopsis is preserved, the whole acid is lupin,Arabidopsis is preserved, the whole acid is the same mechanism. The N-terminal amino acid sequence of the enzyme is determined by the presence of LASAP1 in the upstream amino acid sequence. This domain is highly aquatic and secretory. It is similar to Arabidopsis APase. This domain is secretory and necessary. In the past year, the adjustment may be carried out by LAP493. Now we have to resolve it.