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球状ミニ蛋白質のデノボ合成による蛋白質の構造安定化要因および折れ畳み機構の解明

通过球状小蛋白的从头合成阐明蛋白质结构稳定因子和折叠机制

基本信息

批准号：
08272233
负责人：
李相男
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Fukuoka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

蛋白質の折れ畳みメカニズム、タンパク質表面やタンパク質内部の残基のパッキング等のタンパク質の構造安定化への寄与の精密な評価等、基礎化学的研究を目的として、69残基からなる球状蛋白質に似たミニ人工モデル蛋白質SGPのデザイン,合成をおこなった。この蛋白質は中心に短い脂溶性のα-ヘリックス,その周りを3つのより長い両親媒性塩基性α-ヘリックスでとりまかれた構造からなる。CDによるコンホメイション解析や変性実験などを通じて、この蛋白質がfoldingのメカニズムや球状人工タンパク質の合成の基本モデルになると考えられた。そこで、今回、このSGPを、より天然球状蛋白質に似た状態に近ずけるために、色々なanalogを合成し構成アミノ酸側鎖のパッキング状態を調べた。SGPの4つのα-ヘリックスのうち、中心の脂溶性部は11残基のAla oligomerから、また3本の両親媒性部は16残基からなっており、Leu,Lysを適当に配してα-helixを取ったときに両親媒性になるようにデザインしてある。各々のhelixはGlyを含むβ-ターンループでつなげてある。このSGP関連タンパク質の3つのアナログをデザイン合成してその物性をしらべた。脂溶性α-helixを、より脂溶性の高いLeu oligomerに変えたもの(Leu-SGP)、3つの両親媒性部のLysの一部をGluに変え、荷電相互作用させたもの(SGP-Glu)、βターン部全てをGlyに変えてループ部のフレキシブル度を高めたもの(SGP(Gly))てある。その、物性を調べたところ、Leu-SGPは、SGPより、さらに変性しにく、高濃度のグアニジン塩酸塩の添加後でも変性しない。このことは、脂溶性中心部分が安定化に強く寄与していることを示す。この溶液中の分子量を、Gel-HPLC、及び超遠心沈降法を用いて、調べたところ三量体であった。SGP-Gluも同様に安定化されたが、その度合いはSGPとLeu-SGPの中間に位置した。このものは、水溶液中で、二量体であった。また、SGP(Gly)がSGPとほとんど同じ溶液物性を示したことは、ループ部分は、foldingの要因ではないことを示す。そして、このものは、SGP同様単量体であった。このことは、SGPの適当な改変が会合体の様子を決定しうることをしめし、今後蛋白質の構造と会合体の相関を調べる、格好のモデルとなることをしめす。

Protein's texture Comments on the structural stabilization of residues such as のパッキング, etc.価, etc., researched basic chemistry research on をとして, 69-residue からなるglobular protein に resembles たミニ artificial モデル protein SGP のデザイン, synthesized をおこなった.このproteinはcentricにshortいfat-solubleのα-ヘリックス,そのweekりを3つのより长い両philic compatibility α-ヘリックスでとりまかれたstructural からなる. CDによるコホメイションanalysisや変性実験などを通じて、このproteinがfold ingのメカニズムやspherical artificial タンパク性の综合の本モデルになると考えられた.そこで, present time, このSGPを, よりnatural globular protein にsimilar state にNearly ずけるために、色々なanalogを综合し constitutes アミノacid side lock のパッキングstate を Adjustment べた. SGPの4つのα-ヘリックスのうち, central fat-soluble part は11 residue のAla oligomer から、また3本の両tropical part は16 residues からなっており、Leu,Ly sをappropriate matchしてα-helixをtakeったときに両matchmaking sexになるようにデザインしてある. Each 々のhelixはGlyをcontains むβ-ターンループでつなげてある.このSGP is related to タンパク性の3つのアナログをデザイン Synthesis してそのphysical properties をしらべた. Fat-soluble α-helix を, よりfat-soluble の高いLeu oligomerに変えたもの(Leu-SGP), 3つの両Pro-matching sex partのLysの一一をGluに変え, charge interactionさせたもの(SGP-Glu), βターン部全てをGlyに変えてループ部のフレキシブル度を高めたもの(SGP(Gly))てある.その、物性を动べたところ、Leu-SGPは、SGPより、さらに変性しにく、High concentration of のグアニジン塩塩塩のでも変性しない after adding it. The fat-soluble central part is stabilized and strong. The molecular weight in the solution, Gel-HPLC, and supertelecentric sedimentation method are used, and the three-dimensional body is adjusted. SGP-Glu is the same as stabilization, and SGP is the middle position of Leu-SGP.このものは, で in aqueous solution, 2-dimensional body であった.また、SGP(Gly)がSGPとほとんど Same as the solution physical properties を Show したことはループ part は、folding のではないことを Show す.そして, このものは, and SGP are the same as であった.このことは, SGP's appropriate な椉が合体の様子をdeterminationしうることをしめし, From now on, the structure of protein and the related body of the complex will be adjusted and adjusted.