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BHK細胞へ発現させた心筋L型Caチャネルの機能調節とサブユニット構造

BHK细胞表达的心脏L型Ca通道的功能调节和亚基结构

基本信息

批准号：
08268219
负责人：
平野裕司
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08268219/
关键词：
Caチャネル BHK細胞 single channel recording クローン発現系

项目摘要

チャネルを構成する個々のサブユニットのcDNAを組み合わせたクローンチャネル発現実験では、燐酸化を介したCaチャネル活性の調節を再現させることは容易でないことが指摘されている。こうしたなかで我々はBHK細胞(baby hamster kidney cell)に,心筋由来のL型Caチャネルα1サブユニット,骨格筋由来のβとα2/δ,γサブユニットを組み込んで発現させたCaチャネルがnativeのものに極めて近い電気生理学的特性を示し、PKAやPKCを活性化させる操作よって修飾を受けることを確認した。このBHKC12細胞からsingle channel電流を記録すると、灌流液に8Br-cAMPを加えることによりsweepあたりのチャネル開口数の増加と共にチャネル開口時間の増加も認められ、全体としてのチャネル開口確率(NPo)の増加は平均5.7倍に及んだ。一方灌流液にphorbol esterのPMAを加えるとNPoは平均約50%の増加を示したが、PKC活性化作用の無いphorbol esterの4αPDDは無効であった。なお、BHKC12細胞では、これまでnativeの心筋細胞で報告されているもの以外にも複数の小さな開口レベルが観察される。これらのレベル間では相互のtransitionがみられること、また小さな振幅の開口も8Br-cAMPの投与により通常の開口レベルのものと同様の増強効果が見られた点などからこれらのチャネル開口はsubconductance stateであることが推測された。このような小さな振幅のチャネル開口は、頻度は多くないものの、モルモット心室筋などnativeのCaチャネルでも観察された。

The expression of the cDNA of the protein is composed of the protein and the phosphorylation of the protein. In BHK cells (baby hamster kidney cells), the origin of L-type Ca ~(2 +) and α ~(2 +),γ ~(2 +) and β ~(2 +) of the origin of skeletal muscle cells were observed. The electrophysiological characteristics of Ca ~(2 +) and PKC were demonstrated. The BHKC12 cells recorded single channel currents, perfusate 8Br-cAMP increased, the number of sweep openings increased, the total opening time increased, and the total opening accuracy (NPo) increased by an average of 5.7 times. The increase of PMA and NPO in a perfusate was about 50% on average, and the activation of PKC was not affected by PMA and NPO. BHKC12 cells are native to cardiac muscle cells and are observed in a variety of small openings. The amplitude of the 8Br-cAMP transition is usually increased by increasing the amplitude of the 8Br-cAMP transition. The amplitude and frequency of these vibrations are different.