クローン発現系を用いた心筋Caチャネルのα1受容体刺激による機能調節

使用克隆表达系统刺激 α1 受体对心肌 Ca 通道的功能调节

• 批准号: 08670773
• 负责人: 平野 裕司
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670773/
• 关键词: Caチャネル; 交感神経の受容体; BHK細胞; 細胞内情報伝達; パッチクランプ法

心筋L型Caチャネルに対する交感神経α受容体の作用については一定の成績が無く不明な点が多い。こうした受容体を介した情報の伝達経路や調節機序はこれまでnative cellを用いて検討されてきたが、受容体のsubtypeの存在や情報のクロストークなどのため、他のシステムを含まない純粋な実験系が望まれていた。BHK細胞には固有の交感神経α,β受容体は存在せず、これに心筋由来のL型Caチャネルα1サブユニット、骨格筋由来のβとα2/δ,γ各サブユニットを組み込むとCaチャネルをstableに発現させることができる(BHKC12細胞)。このCaチャネルはPKAやPKCを活性化させる操作で修飾を受け、nativeのものに極めて近い電気生理学的特性を示す。そこで我々はBHKC12細胞に交感神経α1受容体を組み込み,α受容体刺激のCaチャネルへの作用を検討した。lipofection法を用い,α1受容体(bovineC型,Lefkowitz教授より供与)をBHKC12細胞にtransientに発現させると、β-galctosidaseを用いた間接評価では約50%の細胞でレセプターの発現が期待できた。このlipofectionを行ったBHKC12細胞を用い、phenylephrine投与による電流変化を検討した。nystatin法による全細胞電流記録で検討すると、7/13の例でCa電流が平均1.3倍に増加し、残りの6例は反応が見られなかった。またcell attach法による単一チャネル電流記録では14例のうち6例でのみチャネル開口確率が1.2-2.5倍に増加した。これらの増強はmethoxamineによってももたらされ、またprazosinはこの増大を抑制したことから、transfectionされたα1受容体を介した作用であると考えられた。

The role of cardiac L-type Ca receptors on sympathetic nerve α receptors has a number of unknown effects. The content of the receiver is contained in the information of the receiver and the adjustment mechanism of the receiver is contained in the information of the receiver subtype. BHK cells have inherent sympathetic neurons α,β receptors, which are composed of α 1-type Ca receptor and α2/δ-type Ca receptor (BHKC12 cells). This paper describes the electrophysiological properties of Ca ~(2 +) and PKC activation, and their effects. We are investigating the role of α1 receptor in BHKC12 cells. In the lipofection method,α1 receptor (bovine type C, Professor Lefkowitz) was detected in BHKC12 cells, and β-galctosidase was indirectly evaluated in about 50% of cells. The lipofection of BHKC12 cells was detected by electron microscope. The Ca current was increased by 1.3 times on average in 7/13 cases and decreased in 6/13 cases. The accuracy of cell attach method was increased by 1.2-2.5 times compared with 14 cases and 6 cases respectively. This increase was caused by methoxamine, and prazosin suppressed this increase. The effect of transformation on the α1 receptor is also evident.

项目成果

Yuji Hirano: "Modulation by dihydropyridines and protein kinases of the recombinant cardiac L-type Ca channel with multiple unitary current amplitudes." Receptors and Channels. 4. 93-104 (1996)

Yuji Hirano：“通过二氢吡啶和蛋白激酶对重组心脏 L 型 Ca 通道进行多个单一电流幅度的调节。”