BHK細胞へ発現させたL型Caチャネルの機能調節(2):燐酸化反応とprotein targeting

BHK细胞表达的L型Ca通道的功能调控（2）：磷酸化反应和蛋白靶向

• 批准号: 09257214
• 负责人: 平野 裕司
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09257214/
• 关键词: Caチャネル; BHK細胞; single channel recording; クローン発現系

1.これまで用いてきた心筋骨格筋混成のCaチャネル発現系(BHKC12)に加え、心筋由来のα1とβ2サブユニットを持つCaチャネルの新しい発現系をBHK細胞に作成した。この新しい系においてもCaチャネルの発現密度は高く、数週間の継代後も単一チャネル電流が容易に記録された。そのコンダクタンスはサブレベルの存在も含めて心室筋細胞やBHKC12のL型Caチャネルと同様であった。一方forskolinや8Br-cAMPの投与によりPKAを介したチャネル機能の調節を調べると、約60%の例でチャネル開口の増強が認められた。2.多くの興奮性細胞でCaチャネルは脱分極に伴ってチャネル活性が増強する(prepulse facilitation)。この機序として神経細胞ではG蛋白の投与があげられ、骨格筋等では燐酸化の関与が示されているが、心筋での増強機序には不明な点が多い。我々はモルモット心室筋および上記BHK細胞に発現させた心筋型のCaチャネルを用いてプレパルスによる増強効果とチャネル燐酸化の関連を単一電流レベルで検討した。テストパルスに先行して持続時間50-400msec、+100mVへの脱分極パルスを与えると、長いチャネル開口を伴うmode2開口が誘発され、その発現頻度はプレパルスの持続とともに増大した。そこでPKA刺激によるbasalのチャネル開口確率(NPo)の変化とmode2開口への移行及び復帰のkineticsとの関係を検討した。Native及び再構成Caチャネルのいずれにおいても、8Br-cAMPやイソプロテレノールがNPoを増大してもfacilitationの状態への移行及び復帰のkineticsには変化は見られず、心筋L型Caチャネルのプレパルスによる増強効果は燐酸化反応とは独立のチャネル状態の変化が関与することが示唆された。

1. In this study, we mixed the Ca tendons into BHK cells (BHKC12), and the origin of the tendons was α 1, β 2, and the origin of the tendons. In recent years, the current density is very high in the Ca system, and it is easy to record the current in future generations. There is a cell containing ventricular tendons (BHKC12L-type Ca) that is the same as that of others. One side of the forskolin 8Br-cAMP investment is in conjunction with the customer PKA system, and about 60% of the customers are in a better position to improve their performance. two。 Multiple sexual disorders (Ca) were associated with increased activity (prepulse facilitation). In the order of the machine, the G protein was injected into the cell, the bone lattice, and so on. The acidified protein was acidified and showed that the heart was not clear. We need to pay more attention to the ventricular tension and the upper BHK cell. We can see that the heart-to-heart type of the Ca device is used to increase the temperature of the heart. The operating time is 50-400msec, + 100mV.The opening of the long-term operating system is accompanied by the opening of the mode2, and the operating temperature is very high. The PKA stimulates the opening rate (NPo) of the basal port to facilitate the transfer of the mode2 opening port and the response rate of the kinetics port. The Native and its components are reorganized into Ca, NPo, facilitation, NPo, kinetics, Ca, and so on. The changes in the state of migration and the changes in the heart, the L-shape of the heart, the strength of the heart, the anti-acidification effect, the anti-acidification effect and the negative acidification effect.