大腸菌DnaAタンパク質機能の制御装置の分子機構

大肠杆菌DnaA蛋白功能调节的分子机制

• 批准号: 08277219
• 负责人: 片山 勉
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08277219/
• 关键词: DNA複製; 細胞周期; 遺伝子制御

(1)DnaAタンパク質不活性化因子(IdaA)の精製と機能解析不活性化因子(IdaA)は、野生型DnaAタンパク質の複製活性を特異的に失活させるタンパク質因子である。我々は免疫沈降法を用いて、IdaAにより、ATP結合型DnaAが、複数開始活性がないADP結合型への変換することを明らかにした。また、IdaA機能促進因子をIdaRを見出した。IdaRによりIdaA機能は36倍に促進されることから、IdaRはDnaA不活性化の調節因子であると考えられる。(2)複製開始に対する正の調節因子の分子遺伝学的同定まず、H-NSタンパク質とDNAアデニン・メチルトランスフェラーゼが、染色体複製を促進していることを見い出した。さらに、我々は、新たな遺伝子3種actB,C,Dを見出した。actBは複製開始の正の制御遺伝子であり、開始反応の同調性維持に必須であることが明らかになった。actCおよびactDは複製開始反応の促進に必要な遺伝子であることが示された。(3)複製開始に対する負の調節因子の分子遺伝学的同定3種の遺伝子を同定し、別の3種を解析中である。同定した遺伝子は、ヘミメチルDNA結合タンパク質seqA、真核生物の26SプロテアソームのホモローグhslU、および、新発見の遺伝子asiAである。AsiAは熱ショック・タンパク質であり変異DnaAの分解に必要であることが明らかになった。さらに、解析中の3種の変異遺伝子(仮にasiD,E,Fとする)のうち、asiDは、野性型dnaA株での複製開始の同調性維持に必要であることが示された。また、asiEおよびasiF変異を単独で保持する株では、それぞれ、細胞体積が、野生型の1/2および1/3になっていた。これら小細胞は、遺伝子欠損によって、細胞分裂周期における複製開始のタイミングが早められたため生成すると考えている。

(1) DnaA タ ン パ ク quality not active factor (IdaA) の refined と function analytical not activation factor (IdaA) は, wild type DnaA タ ン パ ク qualitative の を specific に replication activity deactivation さ せ る タ ン パ ク qualitative factor で あ る. I 々 は を immune sink method with い て, IdaA に よ り, ATP binding type DnaA が, plural beginning active が な い ADP combination type へ の variations in す る こ と を Ming ら か に し た. Youdaoplaceholder0, IdaA function promoting factor をIdaRを are found in た た. IdaR に よ り IdaA function は 36 times に promote さ れ る こ と か ら, IdaR は DnaA not activeness の adjustment factor で あ る と exam え ら れ る. (2) duplicate に す seaborne る is の adjustment factor の molecules but 伝 learn be ま ず, H - NS タ ン パ ク qualitative と DNA ア デ ニ ン · メ チ ル ト ラ ン ス フ ェ ラ ー ゼ が, chromosome copy を promote し て い る こ と を see い out し た. Youdaoplaceholder0, I 々 々, and the new たな have three kinds of actB,C,Dを found that た た. The start of the replication of actB <s:1> the main sequence of the control of the main sequence 伝 the であ であ になった, the start of the antisequence 応, the maintenance of the homology に must である the とが とが the clear ら the になった になった. actCおよびactD された replication begins to reverse 応 <e:1> promotes に necessary な remains 伝 である である とが show された. (3) At the beginning of the replication of に, the molecular heritage of the する negative <s:1> regulatory factor <e:1> 伝 is determined to have three kinds of cultural heritage 伝 molecules を and three kinds of を analysis of を and other <s:1>. With fixed し た heritage 伝 は, ヘ ミ メ チ ル dna-binding タ ン パ ク seqA, eukaryotes の 26 s プ ロ テ ア ソ ー ム の ホ モ ロ ー グ hslU, お よ び, new 発 see traces of の 伝 son asiA で あ る. AsiA は hot シ ョ ッ ク · タ ン パ ク qualitative で あ り - different DnaA の decomposition に necessary で あ る こ と が Ming ら か に な っ た. Three の さ ら に, parsing の - different heritage 伝 child (仮 に asiD, E, F と す る) の う ち, asiD は, wild type dnaA strains で の duplicate の coherence to maintain necessary で に あ る こ と が shown さ れ た. ま た, asiE お よ び asiF - different を 単 で alone keep す る strains で は, そ れ ぞ れ, cell volume が, wild type の 1/2 お よ び 1/3 に な っ て い た. こ れ ら small cell は, heritage 伝 son owe loss に よ っ て, cell division cycle に お け る duplicate の タ イ ミ ン グ が early め ら れ た た め generated す る と exam え て い る.

项目成果

Katayama,T.: "The nucleoide protein H-NS facilitates chromosome DNA replication in Esherichicc coli dnaA mutants" J.Bacteriol.178. 5790-5792 (1996)

Katayama,T.：“核苷蛋白 H-NS 促进大肠杆菌 dnaA 突变体中染色体 DNA 的复制”J.Bacteriol.178。

Katayama,T.: "Diswption of the hsl U gene,which encodes an ATPase subunit of the erkaryotic 26s protea some homolog in Esherichia coli,suppresses the femperature-sensitive dnaA 46 mutation" Biophys.Biochem.Res.commun.255. 219-224 (1996)

Katayama,T.：“hsl U 基因编码大肠杆菌中 26s protea 一些同源物的 ATP 酶亚基，其解散可抑制温度敏感的 dnaA 46 突变”Biophys.Biochem.Res.commun.255。

Kubota,T.and Katayama,T.: "Conformational transition of DnaA protein by ATP:structural analysis of DnaA protein,the initiator of Esherichice coli chromosome replication" Biophys.Biochem.Res.Commun.(印刷中).

Kubota, T. 和 Katayama, T.：“ATP 对 DnaA 蛋白的构象转变：DnaA 蛋白的结构分析，大肠杆菌染色体复制的启动子”Biophys.Biochem.Res.Commun.（出版中）。