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熱帯熱マラリア原虫の23kD蛋白分子の純化とその防御抗原性に関する分子機構の研究

恶性疟原虫23kD蛋白分子的纯化及其保护性抗原性相关分子机制的研究

基本信息

批准号：
08281203
负责人：
狩野繁之
金额：
$ 0.9万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08281203/
关键词：
マラリアワクチン免疫

项目摘要

われわれは実際の流行地の野外調査をもとに免疫学的な解析を進め、その中において23kDタンパク分子をワクチン候補分子と想定し、その機能と構造とを決定すべく研究を行い、当該申請研究においては以下の結果を得た。1.患者血清と種々の抗原分子との反応性フィリピンパラワン島の住民で(1)マラリア原虫の23kD分子と特異的に反応する群では、患者は原虫血症を示しながらも激しい症状を示さず、かつ慢性的な脾腫を提示した。(2)近い過去においてマラリアの症状を示した脾腫を認めない患者群の血清は、23kD分子とは反応しなかった。(3)日本人輸入マラリア患者で急性期にある有症患者からの血清は、やはり23kD分子と反応しなかった。2.23kD抗原ポリペプチドに対するモノクローナル抗体の作製培養原虫抗原からSDS-PAGEを行って分子量23kD蛋白を切り出し、アジュヴァントとともにBALB/c4週齢雌に接種し、ELISA法によってマウスの抗体の上昇を確認した。そのマウスから脾臓を取り出し、ミエローマ細胞と脾細胞とのfusionを行い、融合細胞培養上清中に産生された抗体をIFATによりスクリーニングを行い、熱帯熱マラリア原虫と反応するクローンの拾い出しを行った。3.23kD抗原ポリペプチドのアミノ酸シークエンシングSDS-PAGE、プロッテイング後、23kD分子が転写された部分の膜を切り出し、蛋白を抽出し、proteinaseで処理した後、逆層クロマトグラフィーでその断片化された蛋白を回収した。その蛋白を経時的にMicroblotterでPVDF膜上にプロットし、蛋白ピークに合わせた部分のメンブランを切り出し、再度ペプチドシークエンサーでその配列の一部を決めた。今後も抗原分子の機能に関し更なる意味付けを行わなければならないと考えている。

The following results have been obtained from field studies conducted in the field of immunology in response to current epidemic conditions. 1. Antigen molecules in the serum of patients and the resistance of the island's inhabitants (1) antiprotozoa 23kD molecules and specific antiprotozoa groups, patients with protozoa-related symptoms, and chronic spleen swelling are indicated. (2)The serum of the patients was detected by the 23kD molecule. (3)The Japanese imported the 23kD molecule and anti-virus from the serum of patients with acute symptoms. 2.23 kD antigen was isolated from culture medium by SDS-PAGE, and the rise of antibody against 23kD antigen was confirmed by ELISA. The spleen was extracted from the spleen, the fusion of Mieroma cells and spleen cells was performed, the antibodies produced in the culture supernatant of the fused cells were processed in IFAT, and the hot malaria parasite and anti-virus were recovered. 3.23kD antigen fragments were extracted from SDS-PAGE, protein fragments were extracted from 23kD molecules, and protein fragments were recovered from 23kD molecules. When the protein is added to the Microblotter, the PVDF membrane is removed, and the protein is added to the microblotter again. In the future, the function of antigen molecules will be changed.