重症マラリアと低血糖-原虫由来解糖系酵素の宿主に及ぼす影響に関する研究-

严重疟疾和低血糖 - 原生动物来源的糖酵解酶对宿主影响的研究 -

• 批准号: 11147235
• 负责人: 狩野 繁之
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Research Institute, International Medical Center of Japan
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11147235/
• 关键词: マラリア; 重症マラリア; 低血糖; 解糖系酵素

1.組換え体マラリア原虫エノラーゼとの抗体の反応性DNAデータベースの配列を基に特異的プライマーを作製し、目的遺伝子を増幅し、組換え融合蛋白質発現ベクターに組み込み、これを導入した大腸菌を大量培養し、発現した組換え体エノラーゼを精製した。SDS-PAGEで泳動した組換え体の48.7kDの抗原タンパクと重症熱帯熱マラリア患者血清とが強く反応することを確かめた。さらには臨床的重症度に従ったタイ患者の血清との反応性を調べたところ、免疫力を獲得しているであろうと考えられる患者血清との反応性が比較的強かった。2.抗エノラーゼ抗体の作製上記組換え体エノラーゼ融合蛋白質を抗原として、Balb/cマウスにアジュヴァントともに感作させた。追加感作を2回行った後、マウスの血清を分離して上記融合タンパクを抗原としたSDS-PAGE、虫体を抗原としたIFATにより特異的抗体の上昇を確認した。3.in vitroでの熱帯熱マラリア原虫増殖阻害試験上記マウスの血清をin vitroでの熱帯熱マラリア原虫培養上清に段階的に濃度を調整して混入し、マウスが産生した抗体が特異的に原虫の増殖を阻害することができるかどうかを解析した結果、最高で70%の増殖阻害を認めることができた。4.エノラーゼ蛋白の発現ステージと蛋白の局在上記マウスの血清を用いて、レーザー走査顕微鏡で蛋白の局在を解析したところ、主に原虫の細胞質内に強く、さらにはメロゾイト周辺にも局在していることが確認された。5.原虫の増殖による糖の消費量in vitroの系において、原虫の増殖により培養上清中の糖の消費がどのくらい行われるかを、経時的に採取した培養上清をワコーグルコースCII-テストキットを用いて調べた。さらには上記で得られた抗体による原虫の増殖阻害が糖の消費量にどの程度影響を及ぼすかを考察した。

1. The anti-DNA sequence of the antibody of the recombinant plasmid is specifically prepared, the target gene is amplified, the recombinant protein is developed, and the recombinant plasmid is introduced into Escherichia coli. SDS-PAGE showed that the 48.7kD antigen in the protein was very strong in the serum of patients with severe fever. The severity of the disease is related to the severity of the disease. The serum of the patient is resistant to the disease. The immunity is obtained. The serum of the patient is resistant to the disease. 2. Anti-virus antibody preparation After two rounds of infection, the serum was isolated and the fusion antigen was confirmed by SDS-PAGE. 3.in vitro's hot zone protozoan proliferation inhibition test notes that the serum in vitro's hot zone protozoan culture supernatant concentration was adjusted to produce antibodies to specific protozoan proliferation inhibition test results, up to 70% of proliferation inhibition test results. 4. The expression of protein in the serum was detected by microscope, and the expression of protein in the cytoplasm was confirmed. 5. Sugar consumption in vitro system, protozoa propagation, culture supernatant, sugar consumption, culture supernatant, culture supernatant The effect of the antibody on sugar consumption was investigated.

项目成果

Pilarita Tongol-Rivera: "Application of seroepidemiology in the evaluation of a community-basedmalaria control program in Palawan, the Philippines"Jpn J Trop Med Hyg. 27・2. 161-165 (1999)

Pilarita Tongol-Rivera：“血清流行病学在菲律宾巴拉望岛社区疟疾控制计划评估中的应用”Jpn J Trop Med Hyg 27・2（1999）。

狩野繁之: "重症マラリアと薬剤耐性"医学のあゆみ. 189・6. 409-410 (1999)

Shigeyuki Kano：“严重疟疾和耐药性”医学史189・6（1999）。

Shigeyuki Kano: "Malaria-if we can control the disease"Jpn J Trop Med Hyg. 27・1. 93-96 (1999)

Shigeyuki Kano：“疟疾——如果我们能够控制这种疾病”Jpn J Trop Med Hyg 27・1（1999）。

Shigeyuki Kano: "Pathology and pathophysiology of malaria"Jpn J Trop Med Hyg. 27・4. 471-476 (1999)

Shigeyuki Kano：“疟疾的病理学和病理生理学”Jpn J Trop Med Hyg 27・476（1999）。

Tomoko Oda: "Suppressed expression of hypoxanthine-guanine phosphoribosyitransferase(HGPRT) in an irradiation-attenuated Plasmodium bergnei XAT strain"Parasitology International. 48・2. 157-167 (1999)

Tomoko Oda：“辐射减弱的伯氏疟原虫 XAT 菌株中次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 (HGPRT) 的表达受到抑制”《寄生虫学国际》48・2 (1999)。