遷移金属含有型転写調節因子による遺伝子発現調節機構に関する研究

含过渡金属转录调控因子基因表达调控机制研究

• 批准号: 09235212
• 负责人: 青野 重利
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Japan Advanced Institute of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09235212/
• 关键词: 転写調節因子; 一酸化炭素; 光合成細菌

本研究では、部位特異的変異導入法によりアミノ酸変異を導入した各種変異型CooAを調製し、それらの各種分光学的性質および、in vivoにおける転写活性化因子としての活性を調べることにより、CooA中に含まれるヘムの軸配位子の決定、COによるCooA活性制御の反応機構の解明を行なった。77Kにおいて酸化型CooAのEPRスペクトルを測定すると、システインが配位したヘムに特徴的なシグナルが観測される。75残基目のシステインをアラニンに置換したもの(C75A-CooA)は、酸化型において五配位高スピンヘム蛋白質に特徴的な電子スペクトルを示した。これらのことから、Cys75は、酸化型CooAではヘム軸配位子として機能していることが分かった。また、還元型およびCO型CooAでは、Cys75はヘムより解離しており、かわりにHis77が配位していることが分かった。C末端部分を削除した変異型CooAを調製し、その性質を調べた結果、CooAにおいてはN末端から131残基目までの部分が、ヘム結合ドメインを構成していることが判明した。CooAの転写調節因子としての活性を評価するため、lacZをレポーターとするin vivoレポーターシステムの構築を行った。プロモーターを欠損したlacZ上流に、CooAにより発現が制御されることが判明しているR.rub run cooF遺伝子のプロモーター領域を挿入することによりレポーター遺伝子を調製した。本レポーター遺伝子を有する大腸菌をCooA発現ベクターにより形質転換後、CO存在下において培養すると、時間の経過と共に、LacZ活性の増加が観測される。COが存在しない場合には、LacZ活性は、ほとんど観測されなかった。これらの結果より、大腸菌内においても、CooAがCOにより活性化され、転写活性化因子として機能していることが分かった。

In this study, site-specific differential introduction methods were used to introduce various isoforms of CoA, modulate various spectroscopic properties, and in vivo write activation factors and modulate the activity of CoA. 77K. The EPR spectrum of acidified CoA is characterized by its coordination and coordination. 75 residues in the amino acid sequence of C75A-CoA, acid sequence of C75A-CoA sequence of C Cys75 is an acid-type ligand. CoA, Cys75, Cys 77, Cys 77, Cys C terminal part is deleted, the heterotype CoA is modulated, the property of CoA is modulated, the part of CoA is deleted, the N-terminal residue 131 is deleted, and the composition of CoA is deleted. CoA's regulatory factors are evaluated in vivo. The first step is to determine whether the R.rub runs in the wrong direction and whether the R.rub runs in the wrong direction. The increase in LacZ activity can be measured with the passage of time after the form and quality of E. coli containing this protein are transformed in the CooA discovery site and cultured in the presence of CO. CO is present, LacZ activity is present, and CO is present. The results of this study are as follows: E. coli, CO, activation, activation, and function.

项目成果

Aono,Shigetoshi: "Signal Transduction in the Transcriptional Activator CooA containing a Heme-based CO Sensor:Isolation of a Dommant Positive Mutant Which is Active as the Transcriptional Activatoreven in the absence of CO" Biochem.Biophys.Res.Commun.240.

Aono，Shigetoshi：“含有基于血红素的 CO 传感器的转录激活剂 CooA 中的信号转导：分离显性阳性突变体，即使在没有 CO 的情况下，该突变体也能作为转录激活剂发挥作用”Biochem.Biophys.Res.Commun.240。

Aono,Shigetoshi: "Site-directed mutagenesis of Cysteine to Serine in a superoxide responsive transcriptional regulator SoxR" J.Mol.Catal. (印刷中). (1998)

Aono，Shigetoshi：“超氧化物响应转录调节因子 SoxR 中半胱氨酸的定点诱变”J.Mol.Catal（出版中）。

Aono,Shigetoshi: "The D13C variant of Bacillus schlegelil 7Fe ferredoxin is on 8Fe ferredoxin as revealed by ^1H-NMR spectroscopy" FEBS Lett.412. 501-505 (1997)

Aono，Shigetoshi：“根据 1H-NMR 光谱显示，Bacillus schlegelil 7Fe 铁氧还蛋白的 D13C 变体位于 8Fe 铁氧还蛋白上”FEBS Lett.412。