DNAメチル化異常を指標としたヒト肺がんで不活性化されている遺伝子の単離

以 DNA 甲基化异常为指标分离人类肺癌中失活的基因

• 批准号: 09253254
• 负责人: 白石 昌彦
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09253254/
• 关键词: DNAメチル化; CpGアイランド; がん抑制遺伝子; 遺伝子不活性化; MBDカラム; SPM法; 肺腺がん; エピジェネティクス

メチル化DNA結合蛋白質MBDを用いたカラムクロマトグラフィー(MBDカラムクロマトグラフィー)とCpGアイランドの選択的単離法SPM法を組み合わせ、ヒト肺がんにおいて高度にメチル化されているCpGアイランドを網羅的に単離するための実験を行った。まず予備実験により、MBDカラムによるDNA断片の分離はメチル化CpG配列の数に依存してなされることを明らかにした。またゲノムDNAにおいては低メチル化状態のCpGアイランドと高メチル化状態のCpGアイランドの分離がMBDカラムを用いることにより可能であることを明らかにした。続いて9例のヒト肺がん由来の高分子DNAを制限酵素Tsp509Iで切断した後MBDカラムで分離し、高度にメチル化されたDNA断片を得た。これをラムダベクターにクローン化し、高メチル化DNAライブラリーを作製した。このライブラリーから任意に選択した50個のクローンをSPM法により解析し、CpGアイランドを含む25個のDNA断片を単離した。得られたクローンに対応するCpGアイランドが実際にヒト肺がんでメチル化されているかどうかをサザン法、PCR法等で解析したところ、多くのものでがん特異的にメチル化がおこっていることが確認された。これらのCpGアイランドに対応する遺伝子は、ヒト肺がんにおいてメチル化により不活性化されていると考えられる。これらの結果はMBDカラムクロマトグラフィーとSPM法を組み合わせることにより、ヒト肺がんでメチル化により不活性化されている遺伝子を網羅的に単離することができることを示している。また今回の研究で作製されたがんにおける高メチル化DNAライブラリーは、がんにおけるエピジェネティックな異常を解明するための有用な材料である。

The DNA binding protein MBD was synthesized by the SPM method using the separation method of MBD and CpG. DNA fragment isolation depends on the number of CpG sequences in the DNA sequence. In addition, it is also possible to use the CpG in the low and high levels of DNA in the high and low levels of DNA. In 9 cases, the DNA fragments were isolated from the DNA fragments by enzyme Tsp509I. This is the first time I've ever seen a DNA virus. 50 DNA fragments were analyzed by SPM method, and CpG fragments were isolated by SPM method. The analysis of CpG and PCR methods is based on the analysis of CpG and PCR methods. This is the first time that CpG has been inactivated. The results of this study are as follows: MBD, SPM, and other methods are used to combine the results of this study. The research of this paper shows that there are some useful materials in the field of DNA synthesis.

项目成果

M.Shiraishi et al.: "Isolation of CpG island fragments:a putative promoter region of the human prostacyclin synthase gene" PROCEEDINGS OF THE JAPAN ACADEMY. 72B・5. 101-103 (1996)

M. Shiraishi 等人：“CpG 岛片段的分离：人前列环素合酶基因的推定启动子区域”日本科学院院刊 72B·5 (1996)。

M.Shiraishi et al.: "The chromosomal organization of the human endogenous retrovirus-like sequence HERV-H" DNA RESEARCH. 3・6. 425-429 (1996)

M. Shiraishi 等人：“人类内源性逆转录病毒样序列 HEV-H 的染色体组织”DNA RESEARCH 3·6 (1996)。