血管内皮細胞のタイト結合蛋白7H6とがん細胞の血管外脱出の抑制

血管内皮细胞紧密连接蛋白7H6及其抑制癌细胞外渗

• 批准号: 09254252
• 负责人: 澤田 典均
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09254252/
• 关键词: タイト結合; ZO-1; 7H6(barmotin); 細胞電気抵抗; occludin

1.目的血管内皮細胞間にはタイト結合が存在し、イオンや蛋白のみならず炎症細胞や癌細胞のintra-およびextra-vasationに関与していると考えられている。したがって、タイト結合の機能(バリア機能)を調節するごとにより癌細胞の血管への出入りを制御できる可能性がある。我々が発見したタイト結合蛋白のひとつ、7H6蛋白(barmotin)の発現はバリア機能と相関するため、barmotinのcDNA発現クローニング、シークエンスを行い、barmotinの機能を明らかにすると共に、タイト結合の機能調節機構を明かにする。2.方法と結果タイト結合を構成する分子は、ZO-1,ZO-2,cingulin,barmotin,symplekinなどが報告されているが、タイト結合の発達した脳の毛細血管内皮細胞では、他の内皮細胞に比べてoccludinの発現が高く、occludinがタイト結合の機能や構造に重要な役割を果たしていると考えられている。そこで、ラット肺毛細血管内皮細胞(RLE)にラットoccludinを強制発現させるために、ラットoccludinをクローニングし、pEF-BOS vecterを用いてRLEに導入した。得られたtransfectantを用いてnorthern blot,western blot,免疫組織化学、免疫電顕、フリーズフラクチャー、細胞電気抵抗、分子透過性などを検討した。その結果、多量のoccludin蛋白が作られ細胞膜に局在したが、タイト結合のバリア機能(電気抵抗値、透過性)に変化は認められなかった。以上から、タイト結合機能発現には、occludinのほかに必須の因子の存在が示唆された。

1. Objective To investigate the relationship between vascular endothelial cells and extra-vasation. It is possible to regulate the function of combination of cancer cells and vascular access control. We found that the protein binding mechanism of barmotin, 7H6 protein (barmotin) and its expression function were related, the cDNA expression of barmotin was related, the function of barmotin was related, and the regulatory mechanism of barmotin binding function was related. 2. Methods The results showed that the binding mechanism of ZO-1,ZO-2,cingulin,barmotin,symplekin was reported in the capillary endothelial cells. The binding mechanism of ZO-1, ZO-2, cingulin, barmotin, symplekin was reported in the capillary endothelial cells. In addition, pEF-BOS vecter was introduced into pulmonary capillary endothelial cells (RLE) under stress. Western blot,Western blot, Immunohistochemistry, Cell electrical resistance, Molecular permeability As a result, a large amount of occludin protein can be used for cell membrane binding and function (electrical resistance, permeability). The presence of the necessary factors for the realization of the above functions is indicated by the presence of occludin.

项目成果

Yamada-Sasamori,Y.et al.: "Rapid induction of 7H6 tight junction-associated protein and paracellular barrier function in capillary endothelial cells of porcine brain in vitro by treatment with astrocyte conditioned medium and cAMP." Med.Electr.Microsc.,.

Yamada-Sasamori,Y.et al.：“通过星形胶质细胞条件培养基和 cAMP 处理，在体外猪脑毛细血管内皮细胞中快速诱导 7H6 紧密连接相关蛋白和细胞旁屏障功能。”

Kojima,T.et al.: "Different changes in expression and function of connexin 26 and connexin 32 during DNA synthesis and redifferentiation in primary rat hepatocytes using DMSO culture system." Hepatology. 226. 585-587 (1997)

Kojima,T.et al.：“使用 DMSO 培养系统在原代大鼠肝细胞中 DNA 合成和再分化过程中连接蛋白 26 和连接蛋白 32 的表达和功能发生不同变化。”

澤田典均 他: "細胞接着装置-タイト結合-と癌" 現代医療. (印刷中).

Norihito Sawada 等人：“细胞粘附装置 - 紧密连接 - 和癌症”现代医学（正在出版）。

Ikeda,T.et al.: "Induction of tyrosine aminotransferase of primary cultured rat hepatocytes depends on the organization of microtubules." J.Cell.Physiol.(印刷中).

Ikeda, T. 等人：“原代培养的大鼠肝细胞酪氨酸转氨酶的诱导取决于微管的组织。”J.Cell.Physiol.（出版中）。

Kimura,H.et al.: "Bacterial lipopolysaccharide reduced intestinal barrier function and altered localization of 7H6 antigen in IEC-6 rat intestinal crypt cells." J.Cell.Physiol.171. 284-290 (1997)

Kimura, H.等人：“细菌脂多糖降低了肠道屏障功能并改变了 IEC-6 大鼠肠隐窝细胞中 7H6 抗原的定位。”